血細(xì)胞檢驗(yàn)是指對(duì)血液中白細(xì)胞(WBC) 、紅細(xì)胞(RBC) 、血小板( PLT) 、血紅蛋白(Hb) 及相關(guān)數(shù)據(jù)的計(jì)數(shù)檢測(cè)分析,也稱(chēng)血常規(guī)檢驗(yàn)。血常規(guī)檢驗(yàn)不僅是診斷各種血液病的主要依據(jù),而且對(duì)其他系統(tǒng)疾病的診斷和鑒別也可提供許多重要信息,是臨床醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)中最常用、最重要的基本內(nèi)容之一。血常規(guī)檢驗(yàn)最原始的手段是通過(guò)顯微鏡人工鏡檢。隨著基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)的發(fā)展,高科技的應(yīng)用,血液細(xì)胞分析儀已成為取代人工鏡檢進(jìn)行血常規(guī)分析的重要手段,尤其是帶分類(lèi)的血液分析儀。無(wú)論是人工鏡檢或使用血液分析儀,要獲得血常規(guī)檢驗(yàn)穩(wěn)定、可靠、準(zhǔn)確的數(shù)據(jù),防止使臨床診療作出錯(cuò)誤的判斷,實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)必須要充分考慮影響血常規(guī)檢驗(yàn)中的多種影響因素,并嚴(yán)格加以控制。
一、標(biāo)本的采集
為了取得準(zhǔn)確、可靠的檢驗(yàn)結(jié)果,必須取得高質(zhì)量的標(biāo)本。高質(zhì)量的標(biāo)本是高質(zhì)量檢驗(yàn)的第一步,保證血液標(biāo)本中各項(xiàng)細(xì)胞的完整形態(tài)是作為血常規(guī)檢驗(yàn)用的高質(zhì)量標(biāo)本的最基本要求。血液細(xì)胞檢驗(yàn)標(biāo)本的制備分為采集和抗凝兩個(gè)步驟。
1. 標(biāo)本的采集:可在不同采血部位取得血常規(guī)檢驗(yàn)標(biāo)本,最常用的途徑是靜脈采血和末梢毛細(xì)血管采血。文獻(xiàn)報(bào)道表明,靜脈血血樣是最可靠的標(biāo)本,手指血是末梢毛細(xì)血管血樣中與醫(yī)學(xué)全在,線靜脈血差異最小且較為穩(wěn)定的血樣。有研究表明,與靜脈血相比,手指血的準(zhǔn)確性和可重復(fù)性仍然較差,白細(xì)胞計(jì)數(shù)明顯升高( + 8 %) ,而血小板計(jì)數(shù)明顯降低( - 9 %) 。因此,絕大多數(shù)專(zhuān)家建議,血常規(guī)檢驗(yàn)特別是應(yīng)用血液分析儀時(shí),應(yīng)使用靜脈血。
2. 標(biāo)本的抗凝:用于血常規(guī)檢驗(yàn)的血樣必須經(jīng)抗凝劑抗凝處理,在目前的眾多抗凝劑中,乙二胺四乙酸( EDTA) ( EDTA-Na2 ,EDTA-K2 ,EDTA-K3) 是對(duì)白細(xì)胞形態(tài)和血小板影響相對(duì)較小的抗凝劑,最適合用于血常規(guī)檢驗(yàn)。除采血因素(生理性因素、采血部位等) 的影響外,多數(shù)情況下,血樣的質(zhì)量取決于血液和抗凝劑的比例。血液比例過(guò)高時(shí),由于抗凝劑相對(duì)不足,血漿中出現(xiàn)微凝血塊的可能性增加,在用于血細(xì)胞分析儀時(shí),微凝血塊可能阻塞儀器,同時(shí)影響一些檢驗(yàn)指標(biāo)。血液比例過(guò)低,抗凝劑相對(duì)過(guò)剩,對(duì)檢驗(yàn)指標(biāo)會(huì)造成嚴(yán)重影響。血液經(jīng)EDTA 抗凝后,細(xì)胞的形態(tài)會(huì)發(fā)生改變,這種改變和時(shí)間及EDTA 濃度有關(guān)。EDTA 的最佳濃度( 與血液比) 為1. 5mg/ ml ,如果血樣少,EDTA 的濃度達(dá)到2. 5 mg/ ml,中性粒細(xì)胞腫脹,分葉消失,血小板腫脹、崩解,產(chǎn)生正常血小板大小的碎片,這些改變都會(huì)使血常規(guī)檢驗(yàn)和血細(xì)胞計(jì)數(shù)得出錯(cuò)誤結(jié)果,這一點(diǎn)在用自動(dòng)血細(xì)胞分析儀時(shí)尤為重要。靜脈血和末梢血均可經(jīng)抗凝劑抗凝成全血標(biāo)本(標(biāo)本中不含稀釋液,或?qū)?biāo)本造成的稀釋的影響極小) 。顯而易見(jiàn),末梢血抗凝標(biāo)本要達(dá)到合適的血液和抗凝劑的比例非常困難,因此,制備全血比例非常困難。多數(shù)專(zhuān)家建議,在制備全血標(biāo)本時(shí),應(yīng)使用定量的含EDTA 鹽的真空采血管采集靜脈血。無(wú)論鏡檢或使用血液細(xì)胞分析儀, 由于絕大多數(shù)的對(duì)標(biāo)本稀釋的稀釋液中含有抗凝劑, 在一定量的稀釋液中可直接加入微量靜脈血或末梢血液(10～40μl) 即可制備成通常所說(shuō)的預(yù)稀釋標(biāo)本。多數(shù)情況下預(yù)稀釋標(biāo)本的制備適用于末梢血的血樣。
二、標(biāo)本的稀釋
血液是由血細(xì)胞和血漿兩部分組成的紅色黏稠混懸液。在進(jìn)行血細(xì)胞檢驗(yàn)計(jì)數(shù)時(shí),直接用血液計(jì)數(shù)是困難的,無(wú)論是鏡檢還是用血細(xì)胞分析儀,血液均需合適準(zhǔn)確的稀釋后才能進(jìn)行血細(xì)胞的檢驗(yàn)計(jì)數(shù)。基于血細(xì)胞分析儀的基本原理,在血細(xì)胞分析儀的設(shè)計(jì)應(yīng)用中,稀釋倍數(shù)和計(jì)數(shù)容量是最重要的設(shè)計(jì)指標(biāo)之一。
20 世紀(jì)50 年代初,美國(guó)人庫(kù)爾特研制了電阻法(小孔原理)血細(xì)胞分析儀。血細(xì)胞的稀釋液為介質(zhì)流動(dòng)的形式通過(guò)傳感器測(cè)量計(jì)數(shù)。血細(xì)胞通過(guò)傳感器時(shí)一定需要排隊(duì)通過(guò),否則
可能就會(huì)造成重合損失。實(shí)際應(yīng)用時(shí),將血液稀釋于稀釋液中形成稀釋標(biāo)本(稀釋比為1 ∶N) ,以流動(dòng)檢測(cè)的方式測(cè)出一定量(V) 的稀釋標(biāo)本內(nèi)的血細(xì)胞數(shù)(T) ,經(jīng)換算后得出血液中的細(xì)胞濃度(L) ,即L=T×
N/V。
由此可見(jiàn),準(zhǔn)確合理的稀釋倍數(shù)(在用于儀器時(shí), RBC、PLT 的稀釋倍數(shù)一般為1∶10000～1∶3 000 ;WBC、Hb 的稀釋倍數(shù)一般為1∶250 左右) 和準(zhǔn)確、穩(wěn)定的測(cè)量容量是血細(xì)胞檢測(cè)的又一重要基礎(chǔ)。稀釋倍數(shù)過(guò)低,會(huì)形成細(xì)胞排隊(duì)通過(guò)傳感器的重合缺損;稀釋倍數(shù)過(guò)大,則會(huì)造成一定測(cè)量容量?jī)?nèi)血細(xì)胞數(shù)量過(guò)少,這都會(huì)嚴(yán)重影響血液細(xì)胞檢驗(yàn)的測(cè)量精度。
三、標(biāo)本的儲(chǔ)存
如前文所述,抗凝劑因時(shí)間和濃度的不同會(huì)造成對(duì)血細(xì)胞形態(tài)的影響。有研究表明,用EDTA 抗凝靜脈血標(biāo)本,在標(biāo)本收集后的5 min 內(nèi)或30 min 后,8 h 內(nèi)(室溫) 檢測(cè),可以得到最佳的檢測(cè)結(jié)果。如果不需要血小板和白細(xì)胞分類(lèi)的準(zhǔn)確數(shù)據(jù),則標(biāo)本可以在2～8℃的條件下儲(chǔ)存24 h。預(yù)稀釋標(biāo)本一般需要在標(biāo)本制備后10 min 內(nèi)予以測(cè)量。如果稀釋液中添加細(xì)胞穩(wěn)定劑,預(yù)稀釋標(biāo)本的存放時(shí)間也不可超過(guò)4 h。
總之,影響血常規(guī)檢驗(yàn)結(jié)果的因素很多,要想取得準(zhǔn)確的檢驗(yàn)數(shù)據(jù),就要在實(shí)驗(yàn)的每一個(gè)步驟中都嚴(yán)格按照操作規(guī)程進(jìn)行。
