免疫細(xì)胞化學(xué)技術(shù)常用試劑介紹

　　二、緩沖液

　　免疫細(xì)胞化學(xué)中應(yīng)用的緩沖液種類較多，即使是同種緩沖液，其濃度、pH、離子強(qiáng)度等也常常不同。在此介紹幾種最常用的緩沖液的配制。

　　1．0.2mol/L(pH7.4)磷酸鹽緩沖液（Phosphate Buffer, PB)

　　試劑： NaH2PO4·2H2O

　　Na2HPO4·12H2O

　　配制方法：配制時(shí)，常先配制0.2mol/L的 NaH2PO4和0.2mol/L的Na2HPO4，兩者按一定比例混合即成0.2mol/L的磷酸鹽緩沖液（PB)，根據(jù)需要可配制不同濃度的PB和PBS。

　�。�1)0.2mol/L的 Na2HPO4；稱取Na2HPO4.12H2o 31.2g(或 NaH2PO4·H2O 27.6g)加重蒸水至1000ml溶解。

　�。�2)0.2mol/L的 Na2HPO4：稱取NaHPO4.·12H2o 71.632g（或 Na2HPO4·7H2O 53.6g或 Na2HPO4·2H2o 35.6g)加重蒸水至1000ml溶解。

　　 （3)0.2mol/L pH7.4的PB的配制：取19ml 0.2mol/L的 NaH2PO4和81ml 0.2mol/L的 Na2HPO4·12H2O,充分混合即為0.2mol/L的PB（pH約為7.4～7.5)。若pH偏高或偏低，可通過改變二者的比例來加以調(diào)整，室溫保存即可。

　　2．0.01mol/L磷酸鹽緩沖生理鹽水（Phosphate Buffered Saline, PBS)

　　試劑：0.2mol/L PB　　　50ml

　　NaCl 　　　　　　　　　8.5～9g(約0.15mol/L)

　　重蒸水 　　　　　　　　至1000ml

　　配制方法：稱取NaCl 8.5～9g及0.2mol/L的PB 50ml，加入1000ml的容量瓶中，最后加重蒸水至1000ml，充分搖勻即可。若擬配制0.02mol/L的PBS，則PB量加倍即可，依此類推。

　　PB和PBS是免疫細(xì)胞化學(xué)實(shí)驗(yàn)中最為常用的緩沖液，0.01mol/L的PBS主要用于漂洗組織標(biāo)本、稀釋血清等，其pH應(yīng)在7.25～7.35之間，否則需要調(diào)整。0.1mol/L的PB常用于配制固定液、蔗糖等。一般情況下，0.2mol/l PB的pH值稍高些，稀釋成0.01mol/L的PBS時(shí)，�？蛇_(dá)到要求的pH值，若需調(diào)整pH，通常也是調(diào)PB的pH。

　　3．Karasson –Schwlt’s磷酸鹽緩沖液

　　試劑： NaH2PO4·H2O　　3.31g

　　Na2HPO4·7H2O　　　　　33.77g

　　重蒸水 　　　　　　　　至1000ml

　　配制方法：同前

　　該緩沖液主要用于配制Zamboni’s固定液。

　　4．0.5mol/L pH7.6的Tris- HCl緩沖液。

　　試劑：Tris(三羥甲基氨基甲烷)　　60.57g

　　1N HCl　　　　　　　　　　　　　約420ml

　　重蒸水 　　　　　　　　　　　　至1000ml

　　配制方法：先以少量重蒸水（300～500ml)溶解Tris,加入HCl后，用1N的HCl或1N的NaOH將pH調(diào)至7.6，最后加重蒸水至1000ml。此液為儲備液，于4℃冰箱中保存。免疫細(xì)胞化學(xué)中常用的Tris-HCl緩沖液濃度為0.05mol/L，用時(shí)取儲備液稀釋10倍即可。

　　該液主要用于配制Tris緩沖生理鹽水（TBS)、DAB顯色液。

　　5．Tris緩沖生理鹽水（Tris Buffered,Saline,TBS)

　　試劑：0.5mol/L Tris-HCl緩沖液　　　100ml

　　NaCl　　　　　　　　　　　　　　　3.5～9g(0.15mol/L)

　　重蒸水　　　　　　　　　　　　　　至1000ml

　　配制：先以重蒸水少許溶解NaCl,再加Tris-HCl緩沖液，最后加重蒸水至1000ml，充分搖勻使Tris終濃度為0.05mol/L。

　　TBS主要用于漂洗標(biāo)本，常用于免疫酶技術(shù)中。

　　6．Tris-TBS(PBS)

　　試劑：Triton X-100　　　　　　　10ml(1%)或3ml(0.3%)

　　0.5mol/L Tris緩沖液（pH7.6)　　1000ml(50ml)或(0.2mol/L的PB)

　　NaCl　　　　　　　　　　　　　　8.5～9g

　　重蒸水　　　　　　　　　　　　　至1000ml

　　配制方法：先以重蒸水少許溶解NaCl后，加入Triton X-100及Tris緩沖液或（PB)，最后加重蒸水至1000ml，充分搖勻。

　　該液常用濃度為1%及0.3%，前者主要用于漂洗標(biāo)本，后者主要用于稀釋血清。

　　7．0.1mol/L（pH7.4)二甲胂酸緩沖液

　　試劑：0.2mol/L二甲胂酸鈉　　　　　　500ml

　　0.1N HCl　　　　　　　　　　　　　　28ml

　　蒸餾水　　　　　　　　　　　　　　　至1000ml

　　配制方法：先稱取二甲胂酸鈉（MW：214)42.8g,加蒸餾水至1000ml，使0.2mol/L的二甲胂酸鈉溶液；再取HCl 1.7ml加蒸餾水至1000ml ,配成0.1N，最后 取0.2mol/L二甲胂酸鈉溶液500ml及0.1n HCl 28ml混合，加蒸餾水至1000ml，即為0.1mol/L的二甲胂酸鈉緩沖液。

　　8．幾種常用的不同pH值緩沖液的配制表

　�。�1)0.2mol/L磷酸鹽緩沖液（pH5.7～8.0)

　　(2)0.05mol/L Tris-HCl緩沖液（pH7.19～9.10)

　　(3)0.2mol/L醋酸鹽緩沖液（pH3.6～5.6)

　　(4)0.1mol/L二甲胂酸鈉緩沖液（pH5.0～7.4)

　　注：HCI可由NCO3代替，配制成二甲胂酸鈉-HNO3緩沖液。

　�。�5)0.2mol/L碳酸鹽緩沖液（pH9.2～10.7)

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