讀者需注意的是:若特征物是各向同性分布,可采用任意方向的隨機(jī)切片。若特征物呈各向異性分布,可采用垂直切片或其他一些方法制作的切片。Mattfeldt等曾提出在一個(gè)組織塊中作三個(gè)互相垂直的切片(three mutually perpendiculer sections )用作研究。目前通用的垂直切片的概念是1986年Baddeley等人提出,指垂直于某任意確定的水平面的隨機(jī)切片,或平行于某一任意確定的垂直軸的隨機(jī)切片。如圖9-8所示,HP為水平面(horizontal plane),VP為垂直面(vertical planes),二個(gè)垂直面互相不是平行關(guān)系,成一定角度。在生物組織中,如皮膚的表皮、各種上皮的外表面均可作為水平面,只要與水平面垂直的各個(gè)方向所切的切片均為垂直切片。骨骼肌纖維的長軸、長骨的長軸均可作為垂直軸,與其平行的切片也作為垂直切片。管狀的器官如消化管、呼吸管道等,可縱向剖開,展平,當(dāng)作水平面,在其中作垂直切片如圖9-9所示:以水平面為基準(zhǔn),垂直切片必需在隨機(jī)的位置和隨機(jī)的方向,在標(biāo)本計(jì)劃中,第一步是需要隨機(jī),常用一組系統(tǒng)隨機(jī)位置的垂直切片(systematic randomly positioned vertical sections),第一個(gè)切面是隨機(jī)的,其余切面則是與第一個(gè)切面或一定的角度而選擇的,如圖中(3)和(4)即表示三個(gè)不同的方向,但都垂直于同平面,即垂直切片互相間有一定的旋轉(zhuǎn)角度。圖9-7擺線測(cè)格中大箭頭所示vertical 表示箭頭方向與標(biāo)本垂直軸一致,即圖9-8中的verfical 所示方向。
如果有的標(biāo)本沒有可辨認(rèn)的垂直軸,可任意確定一個(gè)水平面,來作垂直切片。
圖9-7 示擺線測(cè)格
9-8 示垂直切片
VERTICAL:指垂直軸;
P:水平面;二個(gè)VP為垂直面,互相不呈平行關(guān)系
圖9-9 示管狀器官的垂直切片
六、實(shí)例介紹
因?yàn)閷⒚庖呒?xì)胞化學(xué)方法與圖像分析結(jié)合起來進(jìn)行研究的論文在國內(nèi)國外都還不多。在第六屆國際學(xué)術(shù)會(huì)議上發(fā)表的90多篇論文中只有1篇,因此在實(shí)例介紹中,包括一部分不是免疫細(xì)胞化學(xué)方法,而是用其他組織學(xué)方法與圖像分析結(jié)合起來研究,但這種方法對(duì)研究免疫細(xì)胞化學(xué)標(biāo)本也可借鑒,從中可得到一些啟發(fā)的,也在此選擇性地作一些介紹。
Mcmillan等1983年在第六屆國際體視學(xué)會(huì)議上曾報(bào)告了“用圖像信息處理機(jī)客觀評(píng)定免疫組織化學(xué)染色的組織”,闡明了當(dāng)組織與第一抗體作用時(shí),不斷攪動(dòng)血清,明顯提高了免疫反應(yīng)。Bordier 等1982年用圖像分析法對(duì)大鼠的神經(jīng)垂體進(jìn)行研究,闡明了軸突占神經(jīng)垂體體積的一半,分泌顆粒占軸突體積的20%,加壓素的含量與分泌顆粒的體積密度無關(guān),而與分泌顆粒內(nèi)激素濃度有關(guān)。這些結(jié)果如不用圖像分析法是很難得出的。Steward等1983年用測(cè)量家雞腦單位面積內(nèi)的突觸數(shù)目等,來研究與記憶形成有關(guān)的細(xì)胞學(xué)改變。
英國現(xiàn)在有300萬75歲以上的人,其中有五十萬人患有老年性癡呆(Alzheimer病),這種病過去認(rèn)為是由于年齡增長的不可避免的現(xiàn)象。英國神經(jīng)科學(xué)所用圖像分析儀與谷氨酸鹽受體的放射自顯影法結(jié)合起來對(duì)此病進(jìn)行了重要的研究。由于放射自顯影會(huì)產(chǎn)生一些非特異性的結(jié)合,用圖像分析儀可以從全結(jié)合圖像減去非特異性結(jié)合圖像,而得到特異性結(jié)合圖像,可以測(cè)出特異性結(jié)合的百分率。目前已知道,老年性癡呆患者腦中,與記憶、理性行為及感情行為有關(guān)的區(qū)域內(nèi),神經(jīng)元的進(jìn)行性退變,神經(jīng)遞質(zhì)發(fā)生改變,影響了從一個(gè)神經(jīng)元到另一個(gè)神經(jīng)元的信息傳遞。
我國1991年11月出版的“計(jì)量學(xué)在形態(tài)學(xué)研究中應(yīng)用學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集“共收集論文123篇,其中有關(guān)免疫細(xì)胞化學(xué)與計(jì)量學(xué)結(jié)合的論文共8篇:①大鼠燙傷后下丘腦室旁核和視上核內(nèi)AVP含量變化的形態(tài)學(xué)計(jì)量(第二軍醫(yī)大學(xué)張忠義等)用圖像分析儀測(cè)定AVP陽性反應(yīng)物的面積。②人脊神經(jīng)節(jié) 內(nèi)SP、SK、CGRP免疫反應(yīng)細(xì)胞的比率(中國醫(yī)科大學(xué)方秀斌等),用人工計(jì)數(shù)方法。③交感神經(jīng)元和膽堿能神經(jīng)元中ACh和ChAT顯示比較(軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院汪家政等),用圖像分析法測(cè)定各種參數(shù)。④大鼠脾樹狀突細(xì)胞的組織分布棗S—100蛋白標(biāo)記和立體計(jì)量分析(南京鐵道醫(yī)學(xué)院張錦堃等)用目鏡標(biāo)線片的測(cè)格進(jìn)行定量研究。⑤垂體GH腺瘤細(xì)胞分泌顆粒的免疫膠體金定位檢測(cè)及定量分析(中國人民解放軍總醫(yī)院羅毅等),用圖像分析法測(cè)定各種參數(shù)。⑥胃腸粘膜重度異型增生與腺癌細(xì)胞核DNA含量的測(cè)定及免疫組化的比較研究(上海第二醫(yī)科大學(xué)吳平平等),用顯微分光光度系統(tǒng)進(jìn)行DNA測(cè)量。⑦免疫組化在胃癌病理?xiàng)椛飳W(xué)分型中的價(jià)值(濱州醫(yī)學(xué)院張樹畢等),將免疫組化反應(yīng)分為陽性陰性而進(jìn)行比較。⑧人胎十二指腸EC細(xì)胞的體視學(xué)研究(江西醫(yī)學(xué)院朱清仙等)用目鏡標(biāo)線片測(cè)格進(jìn)行定量研究。由此可大致體現(xiàn)我國在此領(lǐng)域的研究現(xiàn)狀。