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您現在的位置: 醫(yī)學全在線 > 理論教學 > 基礎學科 > 免疫細胞與核酸分子雜交 > 正文:常用酶的配制
    

常用酶的配制

  1.溶菌酶

  用水配制成50mg/ml的溶菌酶溶液,分裝成小份并保存于-20℃。每一小份一經使用后便予丟棄。

  2.蛋白水解酶類

  貯存液 貯存溫度 反應濃度 反應緩沖液 溫度 預處理
  0.01mol/L Tris(pH7.8)  
鏈霉蛋白酶a 20mg/ml -20℃(溶于水) 1mg/ml 0.01mol/L EDTA 37℃ 自消化b
  0.5% SDS  
  0.01mol/L Tris(pH7.8)  
蛋白酶Kc 20mg/ml -20℃(溶于水) 50μg/ml 0.005mol/L EDTA 37~56℃ 無須預處理
  0.5% SDS  

  a:鏈霉蛋白酶是從鏈球菌(Streptomyces griseus)中分離到的一種絲氨酸酶和酸性蛋白酶的混合物。

  b:自消化可消除DNA酶和RNA酶的污染,經自消化的鏈酶蛋白酶的配制方法如下:把該酶的粉末溶解于10mmol./l Tris·HCl(pH7.5)、10mmol/l NaCl中,配成20mg/ml濃度,于37℃溫育1h。經消化的鏈霉蛋白酶分裝成小份放在密封試管中,保存-20℃。醫(yī)學全在線www.med126.com

  c:蛋白酶K是一種枯草蛋白酶類的高活性蛋白酶,從林伯氏白色念球菌(Tritirachium album Limber)中純化得到。該酶有兩個Ca2+結合位點,它們離酶的活性中心有一定距離,與催化機理并無直接關系。然而,如果從該酶中除去Ca2+,由于出現遠程的結構變化,催化活性將喪失80%左右,但其剩余活性通常已足以降解在一般情況下污染酸制品的蛋白質。所以,蛋白酶K消化過程中通常加入EDTA(以抑制依賴于Mg2+的核酸酶的作用)。但是,如果要消化對蛋白酶K具有較強耐性的蛋白,如角蛋白一類,則可能需要使用含有1mmol/l Ca2+而不含EDTA的緩沖液。在消化完畢后、純化核酸前要加入EGT(pH8.0)至終濃度為2mmol/L,以鰲合Ca2+。

  3.無DNA酶的RNA酶

  將胰RNA酶(RNA酶A)溶于10mmol/l Tris·HCl(pH7.5)、15mmol/l NaCl中,配成10mg/ml的濃度,于100℃加熱15min,緩慢冷卻至室溫,分裝成小份保存于-20℃。

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