如果在測(cè)定活性之前所貯的樣品酶活性有了降低,無(wú)論所用的儀器如何先進(jìn),也不能獲得準(zhǔn)確的結(jié)果。在適當(dāng)?shù)臈l件下酶會(huì)失活,因而必須強(qiáng)調(diào)在收集樣品之后應(yīng)盡可能快速測(cè)試酶活性,最好當(dāng)天進(jìn)行測(cè)定。關(guān)于酶樣品的貯存與醫(yī)學(xué)網(wǎng)處理應(yīng)注意以下幾點(diǎn):
1.酶活力測(cè)定最常用的樣品是血清或血漿。制備血漿所用的抗凝劑可抑制某些酶的活性,如E DTA 能抑制A LP ,草酸鹽抑制LDH ,肝素對(duì)CK 及某些其他酶有輕微的抑制作用,故一般樣品以血清為佳。
2.多數(shù)血清酶以較高濃度存在于紅細(xì)胞、白細(xì)胞或血小板中。因此分離血清時(shí)應(yīng)注意避免溶血。
3.光照對(duì)C K 活性有抑制作用,因此,主張C K 測(cè)定的血清應(yīng)貯存于4 ℃ 的暗處,測(cè)定時(shí)應(yīng)該注意避光。
4.由于血清白蛋白對(duì)酶蛋白有穩(wěn)定作用,在它的存在下,某些酶(如轉(zhuǎn)氨酶)在室溫下可保存1~2 天而無(wú)明顯失活。
5.有些酶由于自身的特性,在貯存時(shí)需特別加以注意。例如L DH 同工酶(L DH 3 、LDH 4 、LDH 5) 在冰箱保存不穩(wěn)定,在室溫反而穩(wěn)定時(shí)間較長(zhǎng),所以測(cè)定L DH 活力的血清樣品,應(yīng)置于室溫下,2~3天內(nèi)可保持穩(wěn)定,不能存放冰箱過(guò)夜。
6.由于酶很容易發(fā)生表面變性,因此在操作時(shí)應(yīng)避免形成泡沫。
7.巰基(-SH )對(duì)于大多數(shù)酶來(lái)說(shuō)是十分重要的,可能起如下幾方面的作用:① 參與催化;② 和底物結(jié)合;③ 組成變構(gòu)部位;④ 維持酶的三級(jí)或四級(jí)結(jié)構(gòu)。因此,使巰基保持天然狀態(tài)是使許多酶穩(wěn)定化的最重要的條件之一,基于這個(gè)理由,在酶的活性測(cè)定、抽提、制備以及保存過(guò)程中,?商砑樱璖 H 保護(hù)劑,如半胱氨酸、谷胱甘肽、2-巰基乙醇、二硫蘇糖醇、二硫赤蘚糖醇等。