�。ㄈ�)神經(jīng)細(xì)胞的類型
依形態(tài)學(xué)分類：Dogiel建議將腸道神經(jīng)元分為三種類型：
1、I型具有許多短的、不規(guī)則的樹突和一根細(xì)而長的軸突。
2、II型有一個短而局限于節(jié) 內(nèi)軸突和許多長的延伸到神經(jīng)節(jié) 外的樹突。
3、III型具有中等長短的樹突，終止于同一或鄰近的神經(jīng)節(jié) 。
Dogiel認(rèn)為I型屬運動神經(jīng)元，II型屬感覺神經(jīng)元。腸道神經(jīng)節(jié) 內(nèi)存在dogiel I型和II型細(xì)胞，還存在其它的中間型細(xì)胞，如在貓的粘膜下神經(jīng)叢中，單極和雙極的神經(jīng)細(xì)胞占83%，多極的神經(jīng)細(xì)胞占17%。這說明腸道神經(jīng)細(xì)胞形態(tài)的多樣性。然而對于其形態(tài)與功能的相關(guān)性，是否I型與II型分別代表感覺及運動神經(jīng)元，多數(shù)學(xué)者持懷疑態(tài)度。
依所含化學(xué)物質(zhì)分類：可分為含乙酰膽堿神經(jīng)細(xì)胞、含胺神經(jīng)細(xì)胞、含嘌呤核苷酸神經(jīng)細(xì)胞和含多肽神經(jīng)細(xì)胞。免疫細(xì)胞化學(xué)技術(shù)是顯示含多肽神經(jīng)細(xì)胞的有力工具�，F(xiàn)已知在消化管壁內(nèi)神經(jīng)叢內(nèi)含有血管活性腸肽、生長抑素、物質(zhì)P和腦啡肽等多肽。用雙重免疫染色法可證明一種以上的多肽共存于神經(jīng)細(xì)胞內(nèi)。
二、消化道全層鋪片技術(shù)
用消化道切片結(jié)合免疫細(xì)胞化學(xué)染色固然能顯示壁內(nèi)神經(jīng)叢的神經(jīng)細(xì)胞及纖維。但由于壁內(nèi)神經(jīng)叢為扁平的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，欲窺其全貌，則以消化道全層鋪片技術(shù)進行免疫細(xì)胞化學(xué)染色效果最佳。消化道全層鋪片在英文文獻中通常稱為whole mount stretch preparation，即整裝撕片。即根據(jù)消化管壁內(nèi)神經(jīng)叢的結(jié)構(gòu)特點，分縱層肌、環(huán)層肌、粘膜下層等分層撕開鋪片，以暴露不同的壁內(nèi)神經(jīng)叢。以腸道為例，簡述消化道的分層鋪片技術(shù)。
動物麻醉后，用Zamboin’s液行主動脈灌注固定，剖腹取任何一段腸管放入上述固定液中4℃下3h，然后移至4%多聚甲醛液固定3h，再移至20%蔗糖4℃過夜，于次日行全層鋪片。選擇一大小適宜的吸管或玻棒穿入腸管，使其被動擴張，然后用鐘表鑷在腸系膜附著處沿腸管縱軸劃痕，用鑷尖沿劃痕輕輕剝離分離縱肌層，將剝離的縱肌層放在載玻片上（漿膜面向下)。在解剖顯微鏡下，用鑷尖輕挑去附于神經(jīng)叢上的環(huán)層肌，即得縱、環(huán)肌之間的肌間神經(jīng)叢。再將腸管的粘膜面向外翻套在吸管或玻棒上，用鑷子或手術(shù)刀反復(fù)刮去表面的上皮層，即可獲固有層表面的粘膜叢，重刮時刮去表面的粘膜層，即可暴露粘膜下層的粘膜下神經(jīng)叢。
撕片放入0.1mmol/L的PBS溶液中，等待進行免疫染色。其步驟與切片染色同，只是由于撕片較厚，為增強抗體的穿透性，常于染色前在系列酒精中反復(fù)脫水后，再進行免疫染色。一般撕片進行免疫染色地漂浮法為佳，可增加壁內(nèi)神經(jīng)叢與抗血清的接觸。如撕片數(shù)量少，為節(jié)約抗血清也可用載片法，此時載玻片上需涂抹一層粘附劑如鉻礬明膠或多聚賴氨酸，以免撕片在染色過程中脫落。
