免疫細胞化學技術在繼續(xù)改進和完善中，新的技術方法不斷出現(xiàn)。除目前國內(nèi)已開始應用的免疫金技術和免疫金銀技術外，80年代，新的免疫細胞化學技術還有半抗原交聯(lián)抗體法和令人矚目的分子雜交免疫細胞化學技術。免疫金銀技術和分子雜交免疫細胞化學技術將分別以專章 敘述，本節(jié) 僅就半抗原交聯(lián)抗體法作一簡要介紹。
【半抗原交聯(lián)抗體法（Hapten –Coupled techniques)】
近年來，為提高敏感性和減低非特異性染色，有些學者（Cammisuli 1976; Jassani 1981; Falini 1983) 在常規(guī)免疫細胞化學技術的基礎上，發(fā)展了半抗原交聯(lián)抗體法，可作免疫熒光或免疫酶染色。本法的基本原理是應用半抗原標記第一抗體。常用的半抗原有阿散酸，即對氨基苯砷酸（Arsanilic acid, ARS),對氨基苯酰甘氨酸（P—aminobenzoyl glycine)，亞對氨苯酰甘氨酸（N—P—aminobonozyl glutamic acid)和二硝基苯氨基丙睛亞胺酸脂（dinitrophenyl aminopropionitrile imido ester, DNP)。通過酰胺化反應把半抗原結(jié)合到抗體分子上。在間接法（二步法)中，先以半抗原標記的特異性抗體（第一抗體)孵育切片，然后加入半抗原的標記抗體，（標記物可為熒光素或酶)（圖6-4)。在PAP染色（三步法)中，先用半抗原標記的第一抗體孵育切片，再加未標記的抗半抗原特異性抗體作為橋抗體，第三步加半抗原交聯(lián)的PAP與之反應，并作酶的呈色反應（圖6-5)。第一和第三抗體分別為半抗原標記的特異性抗體和以半抗原標記的抗酶抗體制備的含半抗原的PAP復合物。本法具有許多優(yōu)點，主要是：①敏感性高。由于本法是通過酰胺化反應標記半抗原，對抗體活性損失極小，抗體保留較高的活性，能結(jié)合較大量的半抗原，平均每個球蛋白分子可同時結(jié)合20個半抗原分子，每個半抗原又可用抗半抗原抗體相結(jié)合，特異免疫反應明顯放大，其敏感性明顯高于常規(guī)的免疫酶和免疫熒光染色技術，特別有助于發(fā)現(xiàn)滴度低的同種抗血清和含抗原量較少的組織。②可用于雙重免疫染色。利用兩種交叉反應的半抗原如阿散酸和對氨基苯酰甘氨酸分別標記來自同一種動物的兩種特異性（第一抗體)血清，應用兩步法或三步法，即可在同一張切片內(nèi)同時顯示兩種不同的抗原。③由于特異性強、敏感性高，因此背景染色低。
圖6-4 半抗原標記抗體酶技術—兩步法
圖6-5 半抗原標記抗體酶技術—PAP法
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