| 公開(kāi)(公告)號(hào) | CN1274823C |
| 公開(kāi)(公告)日 | 2006.09.13 |
| 申請(qǐng)(專利)號(hào) | CN200410052292.X |
| 申請(qǐng)日期 | 2004.11.19 |
| 專利名稱 | 一種人白細(xì)胞介素28B的生產(chǎn)方法及重組IL－28B工程菌 |
| 主分類號(hào) | C12N15/09(2006.01)I |
| 分類號(hào) | C12N15/09(2006.01)I;C12N15/24(2006.01)I;C12N15/10(2006.01)I;C12N15/70(2006.01)I;C12P21/02(2006.01)I;C12N1/21(2006.01)I;A61P31/12(2006.01)I;A61P35/00(2006.01)I;C07K14/54(2006.01)I |
| 分案原申請(qǐng)?zhí)? | |
| 優(yōu)先權(quán) | |
| 申請(qǐng)(專利權(quán))人 | 汕頭大學(xué)醫(yī)學(xué)院 |
| 發(fā)明(設(shè)計(jì))人 | 何韶衡;李明才 |
| 地址 | 515031廣東省汕頭市新陵路22號(hào) |
| 頒證日 | |
| 國(guó)際申請(qǐng) | |
| 進(jìn)入國(guó)家日期 | |
| 專利代理機(jī)構(gòu) | 廣州粵高專利代理有限公司 |
| 代理人 | 陳 衛(wèi) |
| 國(guó)省代碼 | 廣東;44 |
| 主權(quán)項(xiàng) | 一種人白細(xì)胞介素(IL)-28B的生產(chǎn)方法，其特征在于采用基因工程方法生產(chǎn)，所述基因工程方法包括如下步驟： (1)合成PCR引物，并在合成的引物中導(dǎo)入LIC粘性末端， 上游引物：5-GACGACGACAAGATTCCTGTCGCCAGGCTC-3 下游引物：3-GAGGAGAAGCCCGGTTTAGACACACAGGTCCCCGCT-5； (2)PCR擴(kuò)增： 以pcDNA3.1/V5-His-TOPO-IL-28B質(zhì)粒為模板，通過(guò)PCR基因擴(kuò)增，獲得IL-28B基因片段； (3)將上述PCR擴(kuò)增得到的IL-28B基因片段與pET-44Ek/LIC載體連接，構(gòu)建重組載體pET-44Ek/LIC-IL-28B； (4)將重組載體pET-44Ek/LIC-IL-28B轉(zhuǎn)化細(xì)菌，構(gòu)建重組IL-28B工程菌； (5)培養(yǎng)構(gòu)建的重組IL-28B工程菌，誘導(dǎo)其表達(dá)生產(chǎn)IL-28B。 |
| 摘要 | 本發(fā)明公開(kāi)了一種人白細(xì)胞介素28B的生產(chǎn)方法及重組IL-28B工程菌。本發(fā)明包括人工合成引物；PCR擴(kuò)增IL-28B成熟肽編碼區(qū)；IL-28B原核表達(dá)載體pET44-IL-28B的構(gòu)建；轉(zhuǎn)化入大腸桿菌構(gòu)建重組IL-28B工程菌；培養(yǎng)工程菌高效表達(dá)IL-28B；IL-28B的純化。本發(fā)明由于采用不依賴連接反應(yīng)的克隆方法(LIC)，準(zhǔn)確、快速獲得IL-28B基因的成熟肽編碼區(qū)；使用大腸桿菌偏愛(ài)的終止密碼子提高表達(dá)效率，表達(dá)量高，用S蛋白親和層析柱一步純化即可獲得很純的產(chǎn)品。IL-28B的制備，對(duì)臨床用于治療和預(yù)防感染性疾病及非感染性疾病具有重要的前景。 |
| 國(guó)際公布 |
