山楂葉—總黃酮的測定—分光光度法

本方法采用分光光度法測定山楂葉中總黃酮（以無水蘆丁計算)的含量。

本方法適用于薔薇科植物山里紅Crataegus pinnatifida Bge.var.major N.E.Br.或山楂Crataegus pinnatifida Bge.的干燥葉。

本品細粉置于索氏提取器中，依次加入三氯甲烷和甲醇提取，蒸干，加稀乙醇溶解，濾過，續(xù)濾液中依次加入水、5%亞硝酸鈉溶液、10%硝酸鋁溶液、氫氧化鈉試液一定量，搖勻，放置，立即置紫外可見分光光度計, 于波長500nm處測定吸光度，以無水蘆�。–₂₇H₃₀O₁₆)計算總黃酮含量。

1. 三氯甲烷

2 .5%亞硝酸鈉溶液

3 .10%硝酸鋁溶液

4.氫氧化鈉試液

1. 紫外-可見分光光度計

2. 索氏提取器

對照品溶液的制備

精密稱取在120℃干燥至恒重的蘆丁對照品25mg，置50mL量瓶中，加乙醇適量，超聲處理使溶解，放冷，加乙醇至刻度，搖勻。精密量取20mL，置50mL量瓶中，加水至刻度，搖勻，制成每1 mL中含無水蘆丁0.2mg的溶液。

1. 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

精密量取對照品溶液1 mL、2 mL、3 mL、4 mL、5 mL、6 mL，分別置25 mL量瓶中，各加水至6 mL，加5%亞硝酸鈉溶液1 mL，搖勻，放置6分鐘，加10%硝酸鋁溶液1 mL，搖勻，放置6分鐘，加氫氧化鈉試液10 mL，再加水至刻度，搖勻，放置15分鐘，以相應(yīng)試劑為空白，立即照分光光度法，在500nm波長處測定吸光度，以吸光度為縱坐標(biāo)，濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

2. 供試品的測定

取本品細粉1g，精密稱定，置索氏提取器中，加三氯甲烷加熱回流提取至提取液無色，棄去三氯甲烷液，藥渣揮去三氯甲烷，加甲醇繼續(xù)提取至無色（約4小時)，提取液蒸干，殘渣加稀乙醇溶解，轉(zhuǎn)移至50 mL量瓶中，加稀乙醇至刻度，搖勻，作為供試品儲備液。取供試品儲備液，濾過，精密量取續(xù)濾液5 mL，置25 mL量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，精密量取2mL，置25mL量瓶中，加水至6 mL，加5%亞硝酸鈉溶液1 mL，搖勻，放置6分鐘，加10%硝酸鋁溶液1 mL，搖勻，放置6分鐘，加氫氧化鈉試液10 mL，再加水至刻度，搖勻，放置15分鐘，以相應(yīng)試劑為空白，立即照分光光度法，在500nm波長處測定吸光度，從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出供試品溶液中無水蘆丁的重量，計算。

中華人民共和國藥典，國家藥典委員會編，化學(xué)工業(yè)出版社，2005年版，一部，p.22。