吸附樹脂降低膽酸的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究

關(guān)鍵詞： 樹脂吸附 膽酸 動(dòng)物實(shí)驗(yàn)
 　　ANIMAL EXPERIMENTAL STUDY ON EFFECT OF RESIN

　　ADSORPTION ON DECREASE OF CHOLIC ACID

　　Key words:　Resin adsorption; Cholic acid; Animal experiment

　　高膽汁酸血癥出現(xiàn)于多種肝臟疾病。幾乎在所有肝膽疾病中，急性病變的膽汁酸異常率高達(dá)100%，慢性病變的肝膽疾病血清膽汁酸異常達(dá)92%。當(dāng)膽酸迅速上升超過腎臟的排泄功能，病人就出現(xiàn)了高膽酸血癥，及其伴隨癥狀搔癢。膽汁酸含量過高對(duì)機(jī)體有極大的危害性，它不僅會(huì)引起機(jī)體一系列的中毒癥狀，而且由于血液中包括膽汁酸在內(nèi)的多種代射毒性物質(zhì)的積聚會(huì)進(jìn)一步加劇肝臟損傷。對(duì)此常規(guī)治療方法幾乎無效［1］，為改善病人的生存質(zhì)量，為可施行的肝臟移植做準(zhǔn)備，促進(jìn)肝衰竭的自發(fā)性恢復(fù)，改善肝功能，減輕肝臟損害并利其再生，血液灌流吸附清除這些中分子脂溶性物質(zhì)是一種有效的治療方法［2，3］。

　　針對(duì)國(guó)內(nèi)血液凈化清除血液中高膽汁酸的研究空白，結(jié)合國(guó)內(nèi)外研究資料，本實(shí)驗(yàn)選用新型高效NK-111系列樹脂，對(duì)黃疸動(dòng)物模型血液中膽酸進(jìn)行吸附，探討對(duì)膽酸鹽的吸附及血液相容性，為臨床血液灌流治療高膽汁酸血癥提供了最直接的依據(jù)。

　　1　材料與方法

　　1.1　材料

　　1　生理犬：體重14～16kg,雌雄不限。

　　2　NK-111系列樹脂：南開大學(xué)分子生物學(xué)研究所提供，非離子型吸附樹脂體外模擬液吸附膽酸90%以上者。

　　3　儀器設(shè)備：Beckman332高效液相儀，HITACH835氨基酸分析儀，Cobas Mira自動(dòng)生化儀，NIP BP-1血泵，聚四氟乙烯灌流柱(自制)，動(dòng)、靜脈血液管路等。

　　1.2　方法

　　1　模型準(zhǔn)備：采用分流型黃疸模型，動(dòng)物手術(shù)前晚禁食不禁水。肌注氯胺酮0.2g，靜脈給予適量異戊巴比妥及適量安定，總量不超30mg，術(shù)后24h，動(dòng)物出現(xiàn)精神萎糜，尿色明顯加深，術(shù)后48h，血液膽酸濃度明顯上升。

　　2　樹脂準(zhǔn)備：取樹脂100ml,以70%乙醇浸取過夜，去離子水沖洗后，生理鹽水置換，裝入自制的聚四氟乙烯吸附罐內(nèi)，兩端以60目濾網(wǎng)封裝，加壓確認(rèn)無滲漏后，常規(guī)高壓蒸汽滅菌待用。

　　3　血液灌流吸附實(shí)驗(yàn)：模型手術(shù)后觀察，待出現(xiàn)黃疸癥狀，行血液灌流，肌注氯胺酮0.2g，采用股動(dòng)、靜脈插管形成灌流回路。生理鹽水充分沖洗管路及吸附罐，肝素鹽水預(yù)充盈管路，連接動(dòng)、靜脈插管，以100ml/min的速度進(jìn)行血液灌流吸附，吸附60min，定時(shí)于動(dòng)脈插管遠(yuǎn)端采血。通過前肢靜脈60min補(bǔ)液300ml。全部實(shí)驗(yàn)組動(dòng)物在整個(gè)吸附過程中未出現(xiàn)出血及管路凝血現(xiàn)象。

　　4　測(cè)試方法：膽酸分析采用Sep-PAK富集方法經(jīng)HPLL分析［4］，標(biāo)準(zhǔn)品為Sigma公司產(chǎn)品；氨基酸分析采用HITACHI835型分析儀；Cobas Mira全自動(dòng)生化分析儀分析肝功能；凝血酶原時(shí)間采用一步法藥合，Sysemx F800血細(xì)胞計(jì)數(shù)儀分析全血細(xì)胞。

　　2　結(jié)果與討論

　　2.1　灌流吸附前后血清中膽酸含量的變化

　　用HPLC方法分析檢測(cè)血液中7種膽酸的含量：�；悄懰�(TCA)，甘氨膽酸(GCA)，�；蛆Z脫氧膽酸(TCDCA)，�；敲撗跄懰�(TDCA)，甘氨鵝脫氧膽酸(GCDCA)，甘氨脫氧膽酸(GDCA)，�；鞘�膽酸(TLCA)。

表1　樹脂吸附前后血中膽酸含量變化　　　(μmol/L,　n=12)

時(shí)間	0	15	30	45	60
JC	2.838±2.750	1.469±1.049	1.399±0.825	1.243±1.103	0.708±0.568
GC	6.337±6.250	3.099±2.829	2.647±2.325	1.697±1.419	1.412±1.422
TCDC	2.843±2.130	2.560±2.110	0.899±0.754	1.803±1.068	0.606±0.417
TDC	3.198±2.641	2.322±2.526	1.173±1.322	0.704±0.537	0.549±0.998
GCDC	4.825±2.225	2.286±1.530	1.527±1.168	0.597±0.497	0.322±0.290
GDC	4.322±4.362	3.236±3.305	2.000±1.536	1.063±1.176	0.325±0.333
TLC	2.350±2.369	2.259±2.424	0.949±0.512	0.916±1.114	0.230±0.215

　　7種結(jié)合膽酸變化情況：TC，GC，TCDC，TLC 4種膽酸起始濃度與終末比較顯著下降；TDC，GDC兩種膽酸起始濃度與45min濃度相比顯著下降；GCDC的變化15min起即有明顯下降。

　　動(dòng)物實(shí)驗(yàn)表明膽酸的吸附與體外實(shí)驗(yàn)比較，NK-111樹脂在動(dòng)物模型吸附過程中的吸附能力有所下降，這一點(diǎn)與體內(nèi)高膽酸蓄積以及吸附過程中膽酸仍不斷產(chǎn)生有關(guān)。膽酸的產(chǎn)生、蓄積與吸附這三者之間存在著一種動(dòng)態(tài)平衡。因此，是否可以認(rèn)為在體內(nèi)肝毒性物質(zhì)的蓄積較低的情況下及早進(jìn)行血液凈化對(duì)臨床癥狀的改善更為有利。

　　7種結(jié)合膽酸在經(jīng)NK-111系列樹脂吸附后平均下降率為62.5%。其中TC下降率47.5%，GC下降率53.6%，TCDC下降率52.7%，GCDC下降率76%，TDC下降率63.7%，TLC下降率74.5%，同國(guó)外吸附劑比較總膽酸吸附率高于國(guó)外劑型^［5］。2.2　血清蛋白在吸附前后的變化

　　經(jīng)NK-111系列樹脂血液吸附1h后血清中總蛋白、白蛋白、球蛋白的數(shù)量與吸附開始時(shí)比較無顯著性差異，P＞0.05，見表2。

表2　血清蛋白在血液灌流前后的變化

	起始	半程	終末	P
TP (g/l)	60.00±14.5	55.60±9.98	52.35±4.80	＞0.05
ALP (g/l)	28.68±5.86	28.25±3.87	30.7±13.9	＞0.05
GL (g/l)	31.7±9.13	28.75±8.03	25.59±3.18	＞0.05

　　2.3　血液灌流前后全血細(xì)胞計(jì)數(shù)的變化

　　全血細(xì)胞吸附前后的變化見表3。

表3　血細(xì)胞計(jì)數(shù)在血液灌流過程中的變化

	紅細(xì)胞(×103/L)	血小板(×109/L)	白細(xì)胞(×109/L)
0	5.54±1.58	55.1±13.1	13.05±5.20
30	5.93±1.68	46.2±16.1	11.20±5.30
60	5.73±1.47	49.2±19.4	9.41±6.12

　　實(shí)驗(yàn)表明經(jīng)包膜處理的NK-111系列樹脂血液吸附后，紅細(xì)胞數(shù)在吸附前后無顯著性差異(P＞0.05)，血小板數(shù)與白細(xì)胞數(shù)有所下降，但不具備統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。凝血酶原時(shí)間延長(zhǎng)不超過50%。實(shí)驗(yàn)中未出現(xiàn)血清蛋白的損失，從表2可以看出，NK-111系列樹脂對(duì)蛋白的吸附量很少，血液灌流1h，總蛋白下降12%。

　　樹脂對(duì)全血細(xì)胞有一定的破壞性，血液灌流1h以后，血小板下降10%，白細(xì)胞下降約27%，但統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)仍不顯著(P＞0.05)。

　　NK-111系列樹脂經(jīng)采用特殊方法包膜處理以后，對(duì)血小板等的破壞減輕了，表現(xiàn)出較好的血液相容性。2.4　血液灌流前后的氨基酸變化

　　我們對(duì)正常生理犬氨基酸分析得到健康成年犬血清氨基酸數(shù)值見表4。

表4　正常生理犬氨基酸分析結(jié)果(n=6,μmol/L)

纈氨酸	163.3±41.0	賴氨酸	223.60±123.5
亮氨酸	49.27±19.77	酪氨酸	44.62±16.23
異亮氨酸	94.40±39.2	苯丙氨酸	67.70±42.6
蘇氨酸	498.00±24.8	鳥氨酸	47.47±18.27
甘氨酸	177.60±78.6	組氨酸	78.70±31.7
丙氨酸	499.40±210.7	精氨酸	104.00±58
胱氨酸	34.55±8.55	脯氨酸	132.10±61.0
蛋氨酸	33.45±17.31

　　血液灌流1h后血漿氨基酸水平出現(xiàn)了一些變化，見表5所示。

表5　血液灌流前后黃疸犬血中某些氨基酸的變化(n=6　μmol/L)

	吸附開始	吸附終末
賴氨酸	273.8±89.7	446.3±68.3	P＜0.05
纈氨酸	260.5±67.9	310.9±62.0	P＜0.001
異亮氨酸	80.1±29.6	137.3±34.3	P＜0.001
亮氨酸	220.6±59.3	304.7±83.2	P＜0.001
酪氨酸	45.1±12.9	43.9±16.3	P＞0.05
苯丙氨酸	118.5±51.6	146.0±16.6	P＜0.05

　　從表中可以看出經(jīng)1h血液灌流，血中賴氨酸、纈氨酸、亮氨酸、異亮氨酸和苯丙氨酸水平都有明顯升高，酪氨酸水平與生理狀態(tài)及吸附開始時(shí)比較均無顯著性差異。

　　本組實(shí)驗(yàn)表明采用NK-111系列樹脂對(duì)黃疸犬血液灌流吸附膽酸獲得了預(yù)期的結(jié)果。NK-111系列樹脂對(duì)膽酸具有較高的吸附能力和較好的血液相容性，尤其對(duì)血小板的破壞很小，因此我們認(rèn)為其作為一種輔助性人工肝及肝移植的“橋梁”在臨床上有廣泛的應(yīng)用前景^［5，6］。

參考文獻(xiàn)

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