1 試劑
1.1樣品稀釋液：取1容積的3.8%枸櫞酸鈉液加入5容積咪唑緩沖液。
1.1.1 咪唑緩沖液
稱0.68g咪唑和1.17g氯化鈉溶于100ml蒸餾水中，加入42.2ml 0.1mol/L鹽酸，然后被 加入蒸餾水至200ml,pH為7.3。
1.1.23.8%枸櫞酸鈉溶液
稱9.5g枸櫞酸鈉溶解于250ml蒸餾水中。
1.2 血小板代用品“兔（人)腦組織的氯仿抽提液”。用前用生理鹽水稀釋至適當(dāng)倍數(shù)。
1.3白陶土生理鹽水混懸液
稱0.5g白陶土加生理鹽水至100ml即可使用。
1.4 基質(zhì)血漿
取人凝血因子Ⅷ含量低于2%的血友病病人血漿或人工基質(zhì)血漿，然后分裝于5ml安瓿，凍干或-30℃保存。
1.50.05mol/L氯化鈣溶液
稱111g氯化鈣溶于1000ml蒸餾水中，配制成1mol/L氯化鈣貯存液，用前進(jìn)行20倍稀釋，配成0.05mol/L氯化鈣溶液。
1.6 人凝血因子Ⅷ標(biāo)準(zhǔn)品及標(biāo)準(zhǔn)血漿
人凝血因子Ⅷ國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)品或經(jīng)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)品標(biāo)化的工作標(biāo)準(zhǔn)（定量分裝凍干，置-30℃保存，一般2IU/ml左右)，用前取樣品稀釋液溶解成1IU/ml。
標(biāo)準(zhǔn)血漿系取30份新鮮正常人血漿等量混合后，分裝于小瓶?jī)?nèi)，置-30℃保存。自采血后至分漿凍結(jié)整個(gè)過程不得超過4小時(shí)。
1.7待測(cè)樣品
按標(biāo)示量加入注射用水溶解，測(cè)定時(shí)稀釋成1IU/ml。
2 測(cè)定
2.1取2支試管，每管加入0.1ml基質(zhì)血漿和0.1ml樣品稀釋液，混勻，再加0.1ml血小板代用品和0.1ml白陶土懸液，混勻，將試管置37℃水浴保溫一定時(shí)間（一般2～6分鐘)，然后加入0.1ml0.05mol/L氯化鈣溶液，記錄凝固時(shí)間，2www.med126.com管平均值為基質(zhì)血漿的“空白”值（一般應(yīng)大于3分鐘)。
2.2 標(biāo)準(zhǔn)品或標(biāo)準(zhǔn)血漿
用樣品稀釋液分別進(jìn)行10倍、20倍、40倍、100倍和200倍稀釋，用不同稀釋濃度標(biāo)準(zhǔn)品代替2.1項(xiàng)試驗(yàn)中樣品稀釋液，按上述方法分別測(cè)定凝固時(shí)間。
2.3 待測(cè)樣品稀釋成約0.02～0.04IU/ml，代替2.1項(xiàng)試驗(yàn)中樣品稀釋液，同時(shí)分別測(cè)定凝固時(shí)間。
2.4測(cè)定時(shí)要求每個(gè)稀釋度平行測(cè)定2管，兩管之差不得超過均值10%，否則重測(cè)。
3 計(jì)算
將標(biāo)準(zhǔn)品5個(gè)不同稀釋度所含人凝血因子Ⅷ單位（IU/ml)，分別取其對(duì)數(shù)值，再將其各相應(yīng)濃度所測(cè)得凝固時(shí)間（秒)，也分別取對(duì)數(shù)值，然后按照統(tǒng)計(jì)學(xué)方法作直線回歸方程。
方程式：log y=b olg x+a
其中xm.gydjdsj.org.cn/shouyi/代表人凝血固子Ⅷ單位數(shù)，y代表測(cè)得相應(yīng)凝固時(shí)間（秒)。
將測(cè)試樣品所得到凝固時(shí)間（秒)代入方程式計(jì)算x值。然后將所得x值乘以樣品稀釋的倍數(shù)，即為每ml中人凝血因子Ⅷ含量。
