可選用以下兩種方法之一種進行。
（一)Vero細胞測定抗體法
1 免疫與采血
用生理鹽水將吸附白喉類毒素標準品和待檢樣品以2倍稀釋法稀釋成3～5個適當稀釋度，每一稀釋度樣品免疫體重10～14g小白鼠8只，皮下注射0.5ml，m.gydjdsj.org.cn/kuaiji/免疫5周后，每個小白鼠采血，分離血清，56℃30分鐘滅活，放-20℃保存。
2 毒素試驗量測定
Vero細胞測定白喉抗體試驗時毒素試驗量采用Lcd/10000。
在96孔培養(yǎng)板中用RPMI1640（或199)培養(yǎng)液將毒素做2倍系列稀釋，每孔50μl，然后向各孔中加入50μl標準白喉抗毒素（0.0001IU)，用膠帶密封，在室溫放置1小時后，加入50μlVero細胞懸液（見3項)密封，放37℃CO2孵箱培養(yǎng)6～7天后，觀察結(jié)果，使細胞死亡的最大毒素稀釋度孔（紅色)就是Lcd/10000。
Lcd/10000的毒素量約相當于1×10-4Lf的毒素適用于本試驗。
3 Vero細胞
RPMI1640（或199)培養(yǎng)液（加青霉素100IU/ml，鏈霉素100μg/ml，胎牛血清10%)。Vero細胞培養(yǎng)于150cm2培養(yǎng)瓶中，待細胞長成占瓶底80%～100%單層時，棄去上層培養(yǎng)液，加10ml0.25%胰酶，放37℃數(shù)分鐘，棄去胰酶，加入10ml培養(yǎng)液，打勻細胞進行計數(shù)（1瓶150cm2培養(yǎng)瓶大約可得10～40×106細胞)。用培養(yǎng)液調(diào)整細胞濃度至2.5×105細胞/ml。
4 陽性對照小白鼠血清
用吸附白喉類毒素免疫1批小白鼠，免疫5周后采血，分離血清，分裝小管，冷凍干燥，保存于-20℃。
5 抗體滴定
按下圖將培養(yǎng)板編號：
A1 A2 A3 A4 A5 A6 A7 A8 A9 A10 A11 A12
B1
C1
D1
E1
F1
G1
H1
（1)向每孔加入50μl培養(yǎng)液，但A11、A12和H11、H12孔不加，而G11、G12加100μl培養(yǎng)液。
（2)取8份待檢血清，分別加入A1至H1孔各50μl，橫向進行2倍系列稀釋，直至A10和H10孔。
（3)將標準白喉抗毒素稀釋至0.008IU/ml，加入A11、A12、B11和B12孔各50μl，從B11和B12孔開始豎向做2倍稀釋至D11和D12孔。
（4)H11和H12孔加入陽性小白鼠對照血清50μl。
（5)除G11和G12孔外，向其余各孔中加入毒素（Ldc/10000)50μl，輕輕轉(zhuǎn)動培養(yǎng)板，混勻，在培養(yǎng)板上貼上膠帶將板孔封閉，放室溫1小時。
（6)收集Vero細胞，進行計數(shù)，并稀釋成2.5×細胞/ml的Vero細胞懸液。
（7)室溫放置1小時之培養(yǎng)板，去膠帶，立即加入50μlVero細胞懸液，再用膠帶封閉培養(yǎng)板，放37℃CO2孵箱培養(yǎng)6天。在24小時及48小時檢查膠帶封閉情況，如出現(xiàn)封閉不嚴應(yīng)更換。
（8)培養(yǎng)6天后取出培養(yǎng)板，根據(jù)培養(yǎng)液顏色變化記錄結(jié)果，黃色為（+)，紅色為（-)，羲色不明顯者則可用顯微鏡觀察，如單層細胞完整無損則為（+)，否則記錄（-)。最終結(jié)果以打分表示，即變成黃色的最高稀釋度孔的2的指數(shù)，例如：變黃的最后一孔是1/256即28，則結(jié)果記為8。
6 試驗要求
E11、E12、F11和F12孔代表毒素量和Vero細胞敏感度都出現(xiàn)（-)，如果出現(xiàn)（+)，則毒素量和細胞敏感度都很低，應(yīng)重試。
細胞孔G11、G12和陽性對照孔H11、Hm.gydjdsj.org.cn/shiti/12必須是（+)，如出現(xiàn)（-)，應(yīng)重視。
Lcd/10000毒素量的準確性，根據(jù)以上計劃下列各孔中所加標準抗毒素為：
孔A11和A120.0004IU
B11和B120.0002IU
C11和C120.0001IU
D11和D120.00005IU
如毒素用量準確（Lcd/10000)，則A11、A12和B11、B12孔應(yīng)為（+)，而C11、C12和D11、D12應(yīng)為（-)，否則應(yīng)重試。
7 結(jié)果計算
用平行線分析法進行結(jié)果計算
8 結(jié)果判定
待檢樣品的效價每劑量應(yīng)不少30IU。如95%可信限大于50%～200%，則95%可信限的低限效價應(yīng)大于30IU/1個人用劑量。
（二)豚鼠毒素攻擊法
1 免疫及攻擊
用生理鹽水將吸附白喉類毒素標準品和待檢樣品稀釋成等比間隔的3～5個稀釋度（中間的稀釋度必須在攻毒后能保護約半數(shù)動物)，每一稀釋度樣品免疫體重250～300g之豚鼠至少10只，另外5只豚鼠不注射作為對照。免疫后4周，每只免疫豚鼠攻擊白喉毒素100LD50，皮下注射1.0ml。對照組健康動物注射100倍稀釋之上述毒素，每只皮下注射1.0ml。攻擊毒素后觀察5日，每日記錄結(jié)果。
2 試驗成立應(yīng)具備的條件
（1)檢品的最低稀釋度能保護半數(shù)以上動物。
（2)檢品的最高稀釋度保護半數(shù)以下動物。
（3)對照組動物應(yīng)部分死亡而不全部死亡。
（4)檢品和標準品的劑量反應(yīng)曲線在平行性及直線性上沒有太大的偏差。
3 結(jié)果計算及結(jié)果判定
見Vero細胞法7和8項。
