豬藍耳病毒的分離與鑒定是怎樣的?
-----
目前多將豬原代肺泡巨噬細胞、CL2621細胞系和Marc145細胞用于該病毒培養(yǎng)的分離。 細胞培養(yǎng)法：病毒分離樣品選擇和采取的所有操作應(yīng)為無菌規(guī)程進行。用免疫組化技術(shù)檢查發(fā)現(xiàn)，病毒存在于病豬的肺泡巨噬細胞，細支氣管上皮、肺泡上皮細胞，脾臟的紅髓及邊緣區(qū)的巨噬細胞內(nèi)。①病毒分離的首選材料是肺、扁
桃體、脾、淋巴結(jié)和血清，死產(chǎn)和
流產(chǎn)胎兒的脾肺血清和胸水是適宜的檢驗材料，弱胎豬和有呼吸道癥狀的急性感染豬的檢出率最高。②常用細胞培養(yǎng)法的細胞系：已知PRRS病毒能在
豬肺泡巨噬細胞(PAM)、傳代細胞CL2621和Marc145等細胞系生長。③病毒的分離取流產(chǎn)胎兒，新生仔豬的肺、脾、肝、腎、心、腦、扁桃體、支氣管、淋巴結(jié)、胸腺和骨髓勻漿制成懸液，進行分離病毒。用含抗生素的維持液（含2%胎
牛血清隨MEM營養(yǎng)液)做1:10稀釋，4500r/min離心30min，經(jīng)0.45nm濾膜過濾，上清用MEM做1：30稀釋，接種于豬肺泡巨噬細胞(PAM)或CL2621、MA104細胞單層，于35℃吸附24h，加含4%胎牛血清的MEM，培養(yǎng)7d，觀察CPE。首次傳代有時可能無CPE，需
盲傳2-3代。不同的毒株可能適應(yīng)不同的細胞系，有些毒株僅能在PAM或僅能在CL2621細胞中生長，歐洲株在PAM_上的復(fù)制速度更快、效率更高，而CL2621更有利于北美毒株的分離。出現(xiàn)CPE并能被特異的抗血清中和的樣品即為PRRS病毒。也可將分離到的病毒用免疫過氧化物酶單層細胞試驗進行鑒定。大多數(shù)分離物都能適應(yīng)PAM，尤其是用血清作為分離樣品，但不同的毒株對不同細胞是有選擇的。有的只能在一種細胞上生長，有的可在多種細胞上生長。以血清和肺組織分離成功率最高，木乃伊胎最低�？捎糜诓《捐b定的技術(shù)有單克隆抗體或多克隆抗體免疫熒光抗體技術(shù)和單層過氧化物酶試驗，RT-PCR技術(shù)以及電鏡技術(shù)。
-----
學(xué)習(xí)了，
畜牧導(dǎo)航:
養(yǎng)豬資訊 豬價格行情 養(yǎng)豬技術(shù) 豬病防治 飼養(yǎng)管理 養(yǎng)豬問答 養(yǎng)豬視頻 豬品種
