| 公開(公告)號(hào) | CN1167798C |
| 公開(公告)日 | 2004.09.22 |
| 申請(qǐng)(專利)號(hào) | CN01125605.2 |
| 申請(qǐng)日期 | 2001.08.10 |
| 專利名稱 | 昆蟲重組雜交病毒表達(dá)載體的構(gòu)建方法 |
| 主分類號(hào) | C12N15/63 |
| 分類號(hào) | C12N15/63;C12N15/64;C12N15/86;C12N15/09 |
| 分案原申請(qǐng)?zhí)? | |
| 優(yōu)先權(quán) | |
| 申請(qǐng)(專利權(quán))人 | 浙江大學(xué) |
| 發(fā)明(設(shè)計(jì))人 | 吳小鋒 |
| 地址 | 310013 浙江省杭州市西湖區(qū)玉古路20號(hào) |
| 頒證日 | |
| 國際申請(qǐng) | |
| 進(jìn)入國家日期 | |
| 專利代理機(jī)構(gòu) | 杭州求是專利事務(wù)所有限公司 |
| 代理人 | 林懷禹 |
| 國省代碼 | 浙江;33 |
| 主權(quán)項(xiàng) | 昆蟲重組雜交病毒表達(dá)載體的構(gòu)建方法，其特征在于它包括：1)材料：昆蟲培養(yǎng)細(xì)胞Sf21和家蠶BmN細(xì)胞，AcNPV和BmNPV病毒，Sf21細(xì)胞培養(yǎng)基TC-100采用GibcoBRL產(chǎn)品，使用前加入體積比為10％的胎牛血清，Tn-5細(xì)胞則使用不含血清的ESF921培養(yǎng)基，采用Expression system公司產(chǎn)品，培養(yǎng)溫度均為27℃，家蠶幼蟲1-3齡人工飼料育，29℃飼養(yǎng)，4-5齡桑葉育， |
| 摘要 | 一種昆蟲重組雜交病毒表達(dá)載體的構(gòu)建方法，利用同源重組的原理，構(gòu)建了介于AcNPV和BmNPV間的雜交重組病毒表達(dá)載體HyNPV。為了減少表達(dá)后重組蛋白的降解，利用“基因knock-out”法刪除了桿狀病毒本身的一種主要蛋白酶-半胱氨酸蛋白酶基因，提高了重組蛋白的穩(wěn)定性和表達(dá)效率。該表達(dá)載體較好地解決了BmNPV表達(dá)系統(tǒng)寄主范圍狹窄及表達(dá)后期重組目的產(chǎn)物受蛋白酶降解的問題。它具有寄主范圍廣，既可感染家蠶，又能感染常用Sf21，Sf9及Tn-5培養(yǎng)細(xì)胞；可使用Sf21，Sf9培養(yǎng)細(xì)胞代替家蠶細(xì)胞加快重組病毒的大量快速制備；由于它對(duì)家蠶和常用昆蟲培養(yǎng)細(xì)胞具有雙重感染性，既可利用Sf21，Sf9細(xì)胞及大型的Tn-5細(xì)胞進(jìn)行無菌狀態(tài)下的細(xì)胞懸浮培養(yǎng)法快速生產(chǎn)重組蛋白，又可以在家蠶中大量表達(dá)，而且重組蛋白生產(chǎn)水平提高50-60％。 |
| 國際公布 |
