| 公開(公告)號 | CN1683523A |
| 公開(公告)日 | 2005.10.19 |
| 申請(專利)號 | CN200510067523.9 |
| 申請日期 | 2005.04.18 |
| 專利名稱 | 一種誘導(dǎo)分化人外周血單個核細胞的方法 |
| 主分類號 | C12N5/08 |
| 分類號 | C12N5/08 |
| 分案原申請?zhí)? | |
| 優(yōu)先權(quán) | 2004.9.20 CN 200410066518.1 |
| 申請(專利權(quán))人 | 上海市第一人民醫(yī)院 |
| 發(fā)明(設(shè)計)人 | 孫寶貴;李為真;戴秋艷 |
| 地址 | 200080上海市武進路85號 |
| 頒證日 | |
| 國際申請 | |
| 進入國家日期 | |
| 專利代理機構(gòu) | 上海正旦專利代理有限公司 |
| 代理人 | 包兆宜 |
| 國省代碼 | 上海;31 |
| 主權(quán)項 | 一種誘導(dǎo)分化人外周血單個核細胞的方法，其特征在于采用分離人外周血單個核細胞后，經(jīng)體外直接培養(yǎng)、5-氮雜胞苷誘導(dǎo)分化得到心肌細胞，包括下述步驟，1)分離人外周血單個核細胞：取人股動脈抗凝血10-15ml，用Ficoll密度梯度離心法分離出人外周血單個核細胞；2)體外培養(yǎng)人外周血單個核細胞：含20％FBS的DMEM培養(yǎng)液、培養(yǎng)箱37℃2、5％CO2，將人外周血單個核細胞種植于包被有明膠的培養(yǎng)瓶中或小玻片上；3)誘導(dǎo)分化人外周血單個核細胞：DMEM培養(yǎng)液中加入5-氮雜胞苷10μmol/L；將人外周血單個核細胞種植于包被有明膠的培養(yǎng)瓶中或小玻片上；4)鑒定心肌細胞標志：進行細胞形態(tài)學(xué)觀察、相關(guān)蛋白的免疫細胞化學(xué)染色和相關(guān)基因的RT-PCR檢測。 |
| 摘要 | 本發(fā)明屬生物技術(shù)領(lǐng)域，涉及一種將人外周血單個核細胞誘導(dǎo)分化為心肌細胞的培養(yǎng)方法。本發(fā)明方法從人外周血分離出單個核細胞，通過體外直接培養(yǎng)，用5-氮雜胞苷誘導(dǎo)其分化為心肌細胞。本發(fā)明方法誘導(dǎo)后的外周血單個核細胞具有心肌細胞的部分特點，又具有干細胞的特征。本方法可最大限度利用有分化潛力的干細胞，避免成體干細胞的損失。為人外周血單個核細胞誘導(dǎo)分化的分離和培養(yǎng)建立了方法學(xué)，為此類研究奠定了基礎(chǔ)。本發(fā)明還為誘導(dǎo)后的單個核細胞回輸體內(nèi)后進一步分化為成熟的、有功能的心肌細胞，恢復(fù)心臟功能的臨床應(yīng)用提供了準備。 |
| 國際公布 |
