| 公開(公告)號 | CN1320120C |
| 公開(公告)日 | 2007.06.06 |
| 申請(專利)號 | CN200510037759.8 |
| 申請日期 | 2005.01.31 |
| 專利名稱 | 制備轉(zhuǎn)基因家蠶的方法及其制藥用途 |
| 主分類號 | C12N15/85(2006.01)I |
| 分類號 | C12N15/85(2006.01)I;C12Q1/68(2006.01)I;A01K67/04(2006.01)I;A61K35/64(2006.01)I |
| 分案原申請?zhí)? | |
| 優(yōu)先權(quán) | |
| 申請(專利權(quán))人 | 蘇州大學(xué);西南農(nóng)業(yè)大學(xué) |
| 發(fā)明(設(shè)計)人 | 貢成良;曹廣力;薛仁宇;何 澤;魏育紅;朱越雄;沈衛(wèi)德;夏慶友;周澤揚;向仲懷 |
| 地址 | 215006江蘇省蘇州市滄浪區(qū)十梓街1號 |
| 頒證日 | |
| 國際申請 | |
| 進入國家日期 | |
| 專利代理機構(gòu) | 蘇州創(chuàng)元專利商標(biāo)事務(wù)所有限公司 |
| 代理人 | 陶海鋒 |
| 國省代碼 | 江蘇;32 |
| 主權(quán)項 | 一種制備帶有人粒細(xì)胞-巨噬細(xì)胞集落刺激因子基因(hGM-CSF)的轉(zhuǎn)基因家蠶的方法，其特征在于：通過基因工程操作將家蠶核型多角體病毒(BmNPV)的IE-1基因啟動子控制下的hGM-CSF基因克隆進以轉(zhuǎn)座子piggyBAC因子為基礎(chǔ)的帶有報告基因的載體，構(gòu)建重組轉(zhuǎn)基因載體，在輔助質(zhì)粒作用下，用精子介導(dǎo)法獲得帶有報告基因的家蠶，檢測到hGM-CSF基因的為熒光蠶，G0代熒光蠶與正常蠶交配后代為G1代，G1代同一蛾圈孵化后單獨飼養(yǎng)，用便攜式熒光燈結(jié)合熒光倒置顯微鏡檢測G1代家蠶幼蟲，結(jié)合PCR檢測，將既有明顯熒光顯示，又能PCR檢測到hGM-CSF基因的同一蛾圈孵化后飼養(yǎng)的G1代轉(zhuǎn)基因家蠶進行雜交育種，獲得G2代，用以上從G1代獲得G2代的方法，將G2代育種制備為G3代，對G2、G3代同樣進行熒光檢測和PCR檢測，保留從G2代到G3代不發(fā)生性狀分離的G3代，對保留的G3代的同一蛾圈蠶種與正常蠶進行單對雜交，同一蛾圈蠶種的雜交后代如果均不發(fā)生性狀分離時，該蛾圈蠶種即為所需轉(zhuǎn)基因家蠶。 |
| 摘要 | 本發(fā)明公開了一種制備帶有人粒細(xì)胞－巨噬細(xì)胞集落刺激因子的轉(zhuǎn)基因家蠶的方法，通過基因工程操作將家蠶核型多角體病毒基因啟動子控制下的人粒細(xì)胞－巨噬細(xì)胞集落刺激因子基因克隆進以轉(zhuǎn)座子piggyBAC因子為基礎(chǔ)的帶有報告基因的載體，構(gòu)建重組轉(zhuǎn)基因載體，在軸助質(zhì)粒作用下，用精子介導(dǎo)法獲得帶有報告基因的家蠶，并檢測到人粒細(xì)胞－巨噬細(xì)胞集落刺激因子基因，育種制成所述轉(zhuǎn)基因家蠶。利用該轉(zhuǎn)基因家蠶的幼蟲或蛹或蛾經(jīng)冷凍干燥后可獲得生白細(xì)胞藥物。本發(fā)明方法實現(xiàn)轉(zhuǎn)基因家蠶制備生白細(xì)胞藥物，生產(chǎn)成本低，不涉及具有潛在危害的病毒基因組，安全性高，藥物效果尤其是口服效果良好，具有十分重大的實施價值。 |
| 國際公布 |
