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脂聯(lián)素-胰升糖素樣肽-1類似肽融合蛋白表達(dá)載體及構(gòu)建

公開(公告)號(hào) CN1320117C  
公開(公告)日 2007.06.06  
申請(qǐng)(專利)號(hào) CN200510050844.8  
申請(qǐng)日期 2005.07.22  
專利名稱 脂聯(lián)素-胰升糖素樣肽-1類似肽融合蛋白表達(dá)載體及構(gòu)建  
主分類號(hào) C12N15/62(2006.01)I  
分類號(hào) C12N15/62(2006.01)I;C07K19/00(2006.01)I;C12N15/70(2006.01)I;C12N15/74(2006.01)I  
分案原申請(qǐng)?zhí)?  
優(yōu)先權(quán)  
申請(qǐng)(專利權(quán))人 浙江大學(xué)  
發(fā)明(設(shè)計(jì))人 趙同峰;谷 衛(wèi);詹宇紅;趙江佩  
地址 310027浙江省杭州市西湖區(qū)浙大路38號(hào)  
頒證日  
國(guó)際申請(qǐng)  
進(jìn)入國(guó)家日期  
專利代理機(jī)構(gòu) 杭州求是專利事務(wù)所有限公司  
代理人 趙杭麗;張法高  
國(guó)省代碼 浙江;33  
主權(quán)項(xiàng) 人脂聯(lián)素-胰升糖素樣肽-1類似肽融合基因的cDNA序列,其特征是:全長(zhǎng)共567個(gè)bp,1-15bp編碼腸激酶識(shí)別序列,16-108bp編碼人胰升糖素樣肽-1類似肽(Glucagons-like Peptide-1Analogues,GLP-1-A),序列長(zhǎng)93bp,其中19-21bp將人胰升糖素樣肽-1(7-37)[Glucagons-like Peptide-1(7-37),GLP-1(7-37)]編碼基因中編碼第8位基酸丙氨酸的密碼子GCT突變?yōu)楦拾彼崦艽a子GGT,109-153bp編碼接頭肽DNA序列,序列長(zhǎng)45bp,154-564bp編碼脂聯(lián)素,序列長(zhǎng)411bp,565-567bp為終止密碼子,該融合基因cDNA序列見SEQ ID NO 1。  
摘要 本發(fā)明公開了人脂聯(lián)素-胰升糖素樣肽-1類似肽融合蛋白表達(dá)載體及構(gòu)建方法。本發(fā)明運(yùn)用PCR技術(shù)獲得人脂聯(lián)素和GLP-1-A編碼基因,脂聯(lián)素基因通過擴(kuò)增脂聯(lián)素球狀域基因獲得,通過將人GLP-1(7-37)編碼基因中編碼第8位氨基酸丙氨酸的密碼子突變?yōu)楦拾彼崦艽a子獲得GLP-1-A編碼基因,運(yùn)用酶切技術(shù),將GLP-1-A和脂聯(lián)素編碼基因定向克隆到表達(dá)載體,獲得人脂聯(lián)素-胰升糖素樣肽-1類似肽融合蛋白表達(dá)載體,經(jīng)轉(zhuǎn)化蛋白表達(dá)細(xì)菌表達(dá)出了含腸激酶識(shí)別序列的人Adiponectin-GLP-1-A融合蛋白,本發(fā)明為進(jìn)一步研究其活性,測(cè)定融合蛋白上GLP-1-A半衰期,得到能促進(jìn)胰島β細(xì)胞分泌胰島素、能改善胰島素抵抗、副作用小的新蛋白提供良好的前期研究。  
國(guó)際公布  
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