乙型肝炎病毒HBsAg檢測假陽性原因分析
目前國內臨床多采用ELISA 法檢測乙型肝炎血清標志物,它以免疫學反應為基礎,將抗原抗體的特異性反應與m.gydjdsj.org.cn酶對底物的高效催化作用相結合,通過洗滌除去多余游離反應物,以保證實驗結果特異性和穩(wěn)定性,但其步驟多,影響因素多,各環(huán)節(jié)均需嚴格按操作規(guī)程進行。
假陽性可能導致因素:
1.內源性因素 血清是最常見的E1 ISA標本,大約有4O 的人血清標本含類風濕因子、補體、嗜異性抗體嗜靶抗原、自身抗體等非特異性物質。它們的存在對El ISA測定有干擾作用易造成假陽性結果,應該在不同時期多次采血以減少假陽性率。
2.外源性因素 1)標本溶血:各種人為因素引起標本溶血,使細胞內過氧化物酶進人血漿,并吸附于細胞及纖維蛋白原上,增加加樣后微孔板洗滌難度,引起HRP活性增高,造成非特異性顯色。阮樂幸口 發(fā)現(xiàn)溶血標本OD值較高,且與溶血程度成正比;2)標本受細菌污染產生非特異性顯色;3)標本保存不當;4)標本凝集不全血清中殘留纖維蛋白原;5)比色時間:有研究 顯示雙波長法比色,延遲10 min或更長時間比色,結果有不同程度的“高檢出”現(xiàn)象,因此檢測應保證終止顯色后及時比色;6)人為因素:試劑因素、加樣不準確、孵育溫度及時間、洗板次數(shù)、顯色液的加入方式、標本有污染和操作不熟練等。
王嫻默等報導6例假陽性標本經(jīng)分析因標本溶血導致假陽性標本有2例,標本離心不全有2例,標本共血污染有2例。實驗結果提示要做好HBsAg檢測工作,提高檢測質量,必須選擇國家衛(wèi)生部批檢合格試劑盒;標本空腹采集無溶血,血清完全分離;操作嚴格按說明書操作規(guī)程進行;臨床檢驗各室應根據(jù)目的不同、項目不同分別采血,防止轉血過程中標本污染可能,導致結果錯誤的發(fā)生;對于陽性標本或可疑標本采用不同廠家不同方法及重新采血復查。
以上筆者通過易造成病毒性肝炎檢測假陽性結果進行分析,在實際工作中應引以借鑒,做好標本的接收、處理、檢測、報告及保存等工作,盡量減少其檢測干擾因素。而現(xiàn)階段由于方法學特定的局限性及試劑盒客觀存在的質量差異,抗原抗體結合有一定線性區(qū)、等價區(qū)和抗原過剩區(qū),只有當HBsAg濃度在線形范圍內,S/CO值與HBsAg濃度呈正相關,故臨床報告化驗單時,不宜單純報告陰、陽性,且建議臨床規(guī)范化驗單,臨床醫(yī)生在化驗單上詳細注明患者病情和分期。