胃腸道與外界相通，其粘膜表面附著各種細菌和病毒。粘膜含有各種組織溶解酶，而且胃粘膜呈酸性，腸粘膜偏堿性，因此在進行免疫細胞化學染色過程中，必須注意以下幾個環(huán)節(jié)�。�
一、抗原的穩(wěn)定性
免疫細胞化學和組織化學就是檢查、鑒定、定位和示蹤組織中各種抗原成分。在組織加工過程中，必須保持抗原的形態(tài)、結構、抗原性和在組織中的位置保持不變，不引起組織產(chǎn)生自發(fā)熒光及其它非特異性著色。原則上越新鮮的組織越適于進行免疫細胞化學和免疫組織化學研究。
1．組織切片標本經(jīng)胃鏡、小腸鏡和大腸鏡等內窺鏡取材可以在直視下根據(jù)研究的內容在不同部位進行取材，即準確又方便。一般組織塊直徑多在0.5～1.0mm左右，適合進行各種抗原的研究。
�。�1)取材方法：將取材部位調整到內窺鏡視野中央，使活檢鉗與粘膜面垂直，然后鉗取。活檢鉗應盡量下壓深取達粘膜全層。取出活檢鉗并打開活檢器時要輕，防止粘膜撕裂。立即將活檢組織輕輕在粘在濾紙上，并盡量使粘膜面與濾紙平行。
�。�2)組織固定：根據(jù)所查抗原的種類采取相應的固定方法。我們的體會是：對某些蛋白類抗原，如免疫球蛋白、SC、CEA等一般用95%冷酒精固定較好。95%乙醇不但能固定蛋白抗原，而且保持與抗體的免疫反應能力，同樣可以進行HE染色。除組織有部分收縮外，組織成分和抗原位置沒有大的改變，組織塊可以在冰箱內長期保存。我們對保存26個月的冷酒精固定組織進行CEA和SC的研究，效果仍很好。對多肽類激素的研究可以用4%多聚甲醛緩沖淮，Bouin 緩沖液或福爾馬林緩沖液進行固定，或直接液氮固定后冷凍切片。冷酒精固定的組織不宜進行多肽類激素的研究。對陳舊性福爾馬林的固定的組織可以在抗原表面形成蛋白衣，直接影響抗原抗體反應。有人用胰酶消化后暴露抗原部位，進行胃泌素細胞的免疫細胞化學染色，也獲得較好結果。要進行胃腸道多肽類神經(jīng)的免疫組化研究，可用含Triton的固定液和冰凍切片。對小白鼠等動物可向血管內注射多聚甲醛等固定劑，然后處死取材。進行細胞膜抗原的單克隆抗體研究時最好用Cryostat冰凍切片，然后丙酮或乙醇固定10min左右。
（3)組織加工：溫度對抗原抗體均有影響。一般在4℃進行脫水和透明。包埋選用低熔點蠟（52℃～56℃)，浸蠟時間以20min左右為宜（因組織塊較小)。脫蠟和脫二甲苯也應在低溫下進行。
�。�4)組織保存及切片：石蠟包埋或其它方法加工后最好立即進行切片和免疫細胞化學染色。根據(jù)不同的抗原也可以在低溫下保存一段時間后再染色。組織切片的免疫細胞化學染色實際上使切面的抗原暴露后直接與抗體相結合，一般組織切片厚度以5～7μm為宜。如果觀察神經(jīng)纖維則以10～20μm為好。太厚則透射光不易通過，影響觀察，易出現(xiàn)自發(fā)熒光。如果進行免疫電鏡觀察，最好超薄切片。醫(yī)學 全在.線提供m.gydjdsj.org.cn
2．涂片或印片標本拉網(wǎng)和內窺鏡下獲得的胃腸道分泌物等可直接涂片，空氣干燥，再用乙醇固定后進行免疫細胞化學染色。涂片和印片缺乏明確的組織結構，標本中常�；煊胁煌螒B(tài)的組織細胞和其它蛋白等無定形成份，很容易造成假陽性，觀察時應當特別注意。
3．組織分離細胞將手術或活檢組織塊用機械研磨或膠原酶消化等方面可分離出細胞，加入培養(yǎng)基，在試管內進行活細胞免疫熒光或免疫酶等免疫細胞化學染色。流式細胞儀進行定量和定性分析。此法對細胞膜抗原的研究有較大價值。我們在試管內用免疫熒光技術對周圍血分離的單核樣細胞進行T淋巴細胞亞群和B淋巴細胞的研究中，發(fā)現(xiàn)OKT3、OKT4、OKT8和Ia的熒光均分布于細胞膜，隨著細胞的滾動，猶如火球，非常清晰。
二、抗體的特異性
示蹤抗原的抗體必須具有高度特異性，盡量減少非特異性染色和干擾。因此染色前必須測定抗體的工作效價，并用嚴格的陽性對照。組織切片應當有連續(xù)切片的HE染色作對照。
三、染色技術的選擇性
應當根據(jù)設備條件，具備的抗體和示蹤抗原的特點進行選擇。我們的經(jīng)驗是：因胞漿性抗原含量較多，可以用簡便和廉價的間接法甚至直接法免疫細胞化學染色；對膜抗原及其它一些微量抗原應當選用PAP或ABC法，如果同時進行兩種以上抗原的檢查，最好進行雙標記和多標記免疫細胞化學染色；為了顯示較弱的抗原，可以用對比染色技術，背景為另一種顏色，使陽性抗原著色更突出。
