(二)氣相色譜儀
1.氣源:FID常用載氣多為氮?dú)饣蚝?TCD多用氦氣或氫氣為載氣;ECD多用氮?dú)饣驓鍤?BR>
2.進(jìn)樣及汽化系統(tǒng)
3.色譜柱和柱溫箱
4.檢測(cè)器
熱導(dǎo)檢測(cè)器TCD:濃度型檢測(cè)器。構(gòu)造簡(jiǎn)單、測(cè)定范圍廣、樣品不破壞,但靈敏度較低。
電子捕獲檢測(cè)器ECD:靈敏度高、選擇性好。對(duì)無(wú)電負(fù)性基團(tuán)的化合物響應(yīng)低。
氫離子火焰檢測(cè)器FID:質(zhì)量型檢測(cè)器。靈敏度高、響應(yīng)快、線性范圍寬,最常用。
(三) 應(yīng)用 1.鑒別:利用保留值進(jìn)行鑒別。
2.檢查
(1) 內(nèi)標(biāo)法加校正因子測(cè)定供試品中某個(gè)雜質(zhì)含量
(2) 外標(biāo)法測(cè)定供試品中某個(gè)雜質(zhì)或主成分含量
(3) 加校正因子的主成分自身對(duì)照法
(4) 不加校正因子的主成分自身對(duì)照法
(5) 面積歸一化法:一般不用于微量雜質(zhì)檢查
3.含量測(cè)定:外標(biāo)法,內(nèi)標(biāo)法
內(nèi)標(biāo)物要求:①原樣品中不含有的組分;②保留時(shí)間與待測(cè)組分相近,但能完全分離;③純度合乎要求。
二、高效液相色譜法
(一)速率理論:高效液相色譜法中影響柱效主要因素為渦流擴(kuò)散項(xiàng)和傳質(zhì)阻抗項(xiàng)。由于液體黏度比載氣大得多,而且柱溫多為室溫,其縱向擴(kuò)散項(xiàng)很小,可忽略不計(jì)。范氏方程簡(jiǎn)化為 H=A +Cμ
(二) 高效液相色譜儀: 1.高壓輸液泵 2.色譜柱:分析型和制備型 3.進(jìn)樣閥 4.檢測(cè)器:①固定波長(zhǎng)檢測(cè)器;②可變波長(zhǎng)檢測(cè)器醫(yī)學(xué)全.在.線.提供. m.gydjdsj.org.cn;③光二極管陣列檢測(cè)器
(三)應(yīng)用:與氣相色譜法相似
三、色譜系統(tǒng)適用性試驗(yàn)方法
1.理論塔板數(shù):不得低于各品種項(xiàng)下規(guī)定的最小理論塔板數(shù)
2.分離度:除另有規(guī)定外,分離度應(yīng)大于1.5
3.重復(fù)性:取各品種項(xiàng)下對(duì)照品2連續(xù)進(jìn)樣5次,除另有規(guī)定外,其峰面積測(cè)量值的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差不大于2.0%
4.拖尾因子:除另有規(guī)定外,拖尾因子應(yīng)在0.95~1.05之間
第三節(jié) 電泳法
熟悉電泳法的基本原理和常用的電泳方法。
了解毛細(xì)管電泳法的基本原理。
一、基本原理
電泳遷移速度 ν=μE
在相同電場(chǎng)強(qiáng)度下,兩組分分離程度取決于二者淌度之差。電泳分離后各組分的相對(duì)位置由組分的電泳泳動(dòng)和緩沖液電滲共同決定。
影響電泳分離的條件包括:
1.緩沖液的pH值和離子強(qiáng)度:pH直接影響組分的荷電情況,是電泳分離的最重要條件。離子強(qiáng)度太小則緩沖容量不足,區(qū)帶易擴(kuò)散;太大則組分移動(dòng)慢,發(fā)熱嚴(yán)重。
2.電場(chǎng)強(qiáng)度:電場(chǎng)強(qiáng)度越大分離越完全,大于20V/cm時(shí)發(fā)熱嚴(yán)重。
3.樣品濃度:通常以1%為宜。太濃拖尾,太稀測(cè)定結(jié)構(gòu)精密度差。
二、各類電泳法
1.紙電泳法 2.醋酸纖維素電泳法 3.瓊酯糖凝膠電泳法 4.聚丙烯酰胺凝膠電泳法 5.SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳法
三、毛細(xì)管電泳法
以彈性石英毛細(xì)管為分離通道,以高壓直流電場(chǎng)為驅(qū)動(dòng)力,依照樣品中各組分之間淌度和分配行為的差異而實(shí)現(xiàn)分離的方法。
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