2017年執(zhí)業(yè)藥師藥物分析章節(jié)知識(shí)點(diǎn)（14)
第六章 色譜法
色譜法是一種物理或物理化學(xué)分離分析方法。先將混合物中各組分分離而后逐個(gè)分析，是分析混合物最有力的手段。具有高靈敏度、高選擇性、高效能、分析速度快、應(yīng)用范圍廣等優(yōu)點(diǎn)。
色譜過(guò)程是物質(zhì)分子在相對(duì)運(yùn)動(dòng)的兩相(固定相和流動(dòng)相)間分配平衡的過(guò)程，可用分配系數(shù)K和容量因子k描述。
例題：色譜過(guò)程使物質(zhì)分子在; A.溶液中達(dá)到平衡的過(guò)程B. 兩相中平衡的過(guò)程C. 固定相中分配的過(guò)程 D. 流動(dòng)相中溶解的過(guò)程
E. 相對(duì)運(yùn)動(dòng)的兩相(流動(dòng)相與固定相)間分配平衡的過(guò)程 答案: E
1.分配系數(shù)K=Cs/Cm，與組分、固定相和流動(dòng)相性質(zhì)和溫度有關(guān)。
2.容量因子k=Ws/Wm，不僅與組分、固定相和流動(dòng)相性質(zhì)和溫度有關(guān)，還與兩相體積有關(guān)。容量因子不等是色譜分離的先決條件。
3.色譜過(guò)程方程：保留時(shí)間與分配系數(shù)關(guān)系tR=t0(1+k)
第一節(jié) 薄層色譜法
掌握薄層色譜法的基本原理、操作方法以及在藥物鑒別、檢查中的應(yīng)用。
一、基本原理
1.吸附薄層色譜：吸附劑對(duì)不同組分A和B具有不同吸附能力，展開(kāi)劑也對(duì)A和B有不同溶解、解吸能力，當(dāng)展開(kāi)劑不斷展開(kāi)， A、B在吸附劑和展開(kāi)劑之間連續(xù)不斷吸附解吸，產(chǎn)生差速遷移得到分離。
2.比移值：Rf=l/l0，為組分遷移距離與展開(kāi)劑遷移距離之比
比移值的最佳范圍是0.3～0.5，可用范圍是0.2～0.8。
影響比移值因素：①被分離物質(zhì)的結(jié)構(gòu)和性質(zhì)。極性較強(qiáng)的組分Rf較小。②薄層板性質(zhì)。吸附劑活性越強(qiáng)，吸附作用就越強(qiáng)，Rf越小醫(yī)學(xué)全.在.線(xiàn).提供. m.gydjdsj.org.cn。③展開(kāi)劑性質(zhì)。極性越強(qiáng)展開(kāi)劑Rf值增大④展開(kāi)劑蒸氣飽和度對(duì)Rf也有較大影響。
3.分離度：R=2d/(W1+W2)，兩相鄰斑點(diǎn)中心距離與兩斑點(diǎn)平均寬度的比值
二、操作方法
1.吸附劑和展開(kāi)劑的選擇
(1)吸附劑：常用有硅膠、氧化鋁、聚酰胺、硅藻土等。硅膠、氧化鋁的活性與含水量有關(guān)，含水量高，活性低，吸附力弱;聚酰胺表面的酰胺基可形成氫鍵，選擇性高。
(2)展開(kāi)劑：極性較強(qiáng)的展開(kāi)劑適用于極性較強(qiáng)組分的洗脫;極性較弱的展開(kāi)劑適用于極性較弱組分的洗脫。加入少量酸、堿可以使極性物質(zhì)斑點(diǎn)集中，減少拖尾，提高分離度。
選擇一般原則是，分離極性較強(qiáng)組分時(shí)選用活性低的薄層板，以極性強(qiáng)的展開(kāi)劑展開(kāi)。分離弱極性組分時(shí)，宜選用活性高的薄層板，以極性弱的展開(kāi)劑展開(kāi)。調(diào)整待測(cè)組分Rf0.3～0.5范圍內(nèi)。
2.薄層板制備：1份固定相與3份水混和涂布，110℃烘30分鐘。
3.點(diǎn)樣與展開(kāi)：點(diǎn)樣一般為直徑2～4mm圓點(diǎn)，距底2.0cm;展開(kāi)距離一般為10～15cm。
4.斑點(diǎn)定位：有色可直接觀察;有熒光在紫外燈下觀察;噴灑顯色劑使組分顯色。
三、應(yīng)用 1.鑒別：比較供試品與對(duì)照品溶液的比移值 2.雜質(zhì)檢查：雜質(zhì)對(duì)照品比較法;高低濃度對(duì)比法
第二節(jié) 氣相色譜法和高效液相色譜法
掌握氣相色譜法和高效液相色譜法的基本原理;色譜系統(tǒng)適用性試驗(yàn)的主要內(nèi)容;氣相色譜法和高效液相色譜法在藥物鑒別、檢查和含量測(cè)定中的應(yīng)用。了解氣相色譜儀和高效液相色譜儀的基本結(jié)構(gòu)。
一、氣相色譜法： 以氣體為流動(dòng)相的色譜法，具有分離效能高、靈敏度高、樣品用量少、分析速度快等優(yōu)點(diǎn)，不適用于難揮發(fā)和熱穩(wěn)定性差的物質(zhì)分析。
(一)基本原理
1.基本概念
色譜峰參數(shù)：峰高或峰面積(用于定量)，峰位(保留值表示，用于定性)，峰寬(用于衡量柱效)
保留值：保留時(shí)間、死時(shí)間、調(diào)整保留時(shí)間
峰寬：標(biāo)準(zhǔn)差、半峰寬、峰寬
2.塔板理論：把組分在兩相間的連續(xù)轉(zhuǎn)移過(guò)程，分解為間歇的在單個(gè)塔板中的分配平衡過(guò)程
理論塔板數(shù) n=5.54(tR/Wh/2)2
色譜柱的理論塔板數(shù)越多，柱效越高;同樣長(zhǎng)度中塔板高度越小，柱效越高。
3.速率理論：主要說(shuō)明使色譜峰擴(kuò)張而降低柱效的因素
范氏方程 H=A+B/μ+Cμ
A為渦流擴(kuò)散項(xiàng)。采用適當(dāng)粒度、均勻的填料并填充均勻可減小渦流擴(kuò)散，開(kāi)管毛細(xì)管柱A=0
B為縱向擴(kuò)散系數(shù)。為減小縱向擴(kuò)散可采用較高的載氣流速;或選擇分子量大的重載氣;也可降低柱溫。
C為傳質(zhì)阻抗系數(shù)。在能完全覆蓋載體表面的前提下，應(yīng)適當(dāng)減少固定液用量。
范氏方程說(shuō)明填充均勻程度、載體粒度、載氣種類(lèi)、載氣流速、柱溫、固定液層厚度對(duì)柱效的影響。
