(一)特異性
抗原抗體的結(jié)合實質(zhì)上是抗原表位與抗體超變區(qū)中抗原結(jié)合點之間的結(jié)合。由于兩者在化學(xué)結(jié)構(gòu)和空間構(gòu)型上呈互補(bǔ)關(guān)系,所以抗原與抗體的結(jié)合具有高度的特異性。這種特異性如同鑰匙和鎖的關(guān)系。例如白喉抗毒素只能與相應(yīng)的外毒素結(jié)合,而不能與破傷風(fēng)外毒素結(jié)合。但較大分子的蛋白質(zhì)常含有多種抗原表位。如果兩種不同的抗原分子上有相同的抗原表位,或抗原、抗體間構(gòu)型部分相同,皆可出現(xiàn)交叉反應(yīng)。
圖9-1沉淀反應(yīng)中沒淀量與抗原抗體的比例關(guān)系
Ag:抗原;Ab:抗體
(二)按比例
在抗原抗體特異性反應(yīng)時,生成結(jié)合物的量與反應(yīng)物的濃度有關(guān)。無論在一定量的抗體中加入不同量的抗原或在一定量的抗原中加入不同量的抗體,均可發(fā)現(xiàn)只有在兩者分子比例合適時才出生現(xiàn)最強(qiáng)的反應(yīng)。以沉淀反應(yīng)為例,若向一排試管中中入一m.gydjdsj.org.cn/Article/定量的抗體,然后依次向各管中加入遞增量的相應(yīng)可溶性抗原,根據(jù)所形成的沉淀物及抗原抗體的比例關(guān)系可繪制出反應(yīng)曲線(圖9-1)。從圖中可見,曲線的高峰部分是抗原抗體分子比例合適的范圍,稱為抗原抗體反應(yīng)的等價帶(zoneofequivalence)。在此范圍內(nèi),抗原抗體充分結(jié)合,沉淀物形成快而多。其中有一管反應(yīng)最快,沉淀物形成最多,上清液中幾乎無游離抗原或抗體存在,表明抗原與抗體濃度的比例最為合適,稱為最適比(optimalratio)。在等價帶前后分別為抗體過剩則無沉淀物形成,這種現(xiàn)象稱為帶現(xiàn)象(zonephenomenon)。出現(xiàn)在抗體過量時,稱為前帶(prezone),出現(xiàn)在抗原過剩時,稱為后帶(postzone)。
關(guān)于抗原抗體結(jié)合后如何形成聚合物,曾經(jīng)有過不少解釋。結(jié)合現(xiàn)代免疫學(xué)的成就呼電鏡觀察所見,仍可用Marrack(1934)提出的網(wǎng)格學(xué)說(latticetheory)加以說明。因為大多數(shù)抗體的巨大網(wǎng)格狀聚集體,形成肉眼可見的沉淀物。但當(dāng)抗原或抗體過量時,由于其結(jié)合價不能相互飽和,就只能形成較小的沉淀物或可溶性抗原抗體復(fù)合物。
在用沉淀反應(yīng)對不同來源的抗血清進(jìn)行比較后,發(fā)現(xiàn)抗體可按等價帶范圍大小分為兩種類型,即R型抗體和H型抗體。R型抗體以家兔免疫血清為代表,具有較寬的抗原抗體合適比例范圍,只在抗原過量時,才易出現(xiàn)溶性免疫復(fù)合物,大多數(shù)動物的免疫血均屬此型。H型抗體以馬免疫血清為代表,其抗原與抗體的合適比例范圍較窄,抗原或抗體過量,均可形成可溶性免疫復(fù)合物。人和許多大動物的抗血清皆屬H型。
(三)可逆性
抗原抗體反應(yīng)遵循生物大分子熱動力學(xué)反應(yīng)原則,其反應(yīng)式為:
[Ab-Ag]/[Ab].[Ag]=k1/k2=k
式中各反應(yīng)項的單位以mol表示,k1表示反應(yīng)速度常數(shù),km.gydjdsj.org.cn2為逆反應(yīng)速度常數(shù),K是反應(yīng)平衡時的速度常數(shù)。由上式可知,K值是反映抗原抗體間結(jié)合能力的指示,所以抗體親和力通常以K值表示。
抗原抗體復(fù)合物解離取決于兩方面的因素,一是抗體對相應(yīng)抗原的親和力;二是環(huán)境因素對復(fù)合物的影響。高親和性抗體的抗原結(jié)合點與抗原表位的空間構(gòu)型上非常適合,兩者結(jié)合牢固,不容易解離。反之,低親和性抗體與抗原形成的復(fù)合物較易解離。解離后的抗原結(jié)合牢固,不容易解離。反之,低親和性抗體與抗原形成的復(fù)合物較易解離。解離后的抗原或抗體均能保持未結(jié)合前的結(jié)構(gòu)、活性及特異性。在環(huán)境因素中,凡是減弱或消除抗原抗體親和力的因素都會使逆向反應(yīng)加快,復(fù)合物解離增加。如pH改變,過高或過低的pH值均可破壞離子間電引力消失。對親合力本身較弱的反應(yīng)體系而言,僅增加離子強(qiáng)度即可解離抗原抗體復(fù)合物的目的;增加溫度可增加分子間的熱動能,加速已結(jié)合的復(fù)合物的解離,但由于溫度變化易致蛋白變性,所以實際工作中極少應(yīng)用。改變pH和離子強(qiáng)度是最常用的促解離方法,免疫技術(shù)中的親和層析就是以此為根據(jù)純化抗原或抗體。