免疫學(xué)和免疫學(xué)檢驗:第二節(jié)　化學(xué)發(fā)光底物

在化學(xué)發(fā)光反應(yīng)中參與能量轉(zhuǎn)移并最終以發(fā)射光子的形式釋放能量的化合物稱為化學(xué)發(fā)光劑或發(fā)光底物。在發(fā)光免疫技術(shù)中常用的化學(xué)發(fā)光底物有以下幾類。

1．氨基苯二酰肼類主要是魯米諾及異魯米諾衍生物，是最常用的一類化學(xué)發(fā)光劑。魯米諾（luminol，5＇-氨基-2，3-二氫-1，4-酞嗪二酮)的分子結(jié)構(gòu)及化學(xué)反應(yīng)式如下：

魯米諾在免疫測定中既可用作標(biāo)記物，也可用作過氧化物酶的底物。異魯米諾衍生物ASEI和ABMI等也是常用的標(biāo)記物。

2．吖啶酯（acridiniumesm.gydjdsj.org.cn/yaoshi/ter，AE)類這類發(fā)光劑不需催化劑的存在，在有過氧化氫的稀堿溶液中即能發(fā)光。反應(yīng)式如下：

圖18-1 電化學(xué)發(fā)光原理

上式反應(yīng)迅速，在1～5s內(nèi)即可完成；具有背景低、信比高的優(yōu)點(diǎn)，其檢測極限可達(dá)5×10^-9mol，發(fā)光量與AE濃度呈良好的線性反應(yīng)，是一類的標(biāo)記物。

3．電化學(xué)發(fā)光（electrochemiluminescence，ECL)反應(yīng)在電極表面進(jìn)行。發(fā)光底物為三聯(lián)吡啶釕[Ru(bpy)₃²⁺]，另一反應(yīng)物為三丙胺（TPA)。在陽電極表面，以上兩化學(xué)物質(zhì)可同時失去電子發(fā)生氧化反應(yīng)（圖18-1)。二價的Ru(bpy)₃²⁺被氧化成三價Ru(bpy)₃³⁺，TPA被氧化成陽離子自由基TPA^+●，后者失去一個質(zhì)子（H⁺)，成為自由基TPA^●，這是一個強(qiáng)還原劑，可將一個電子遞給三價的Ru(bpy)₃^2+*，而TPA自身被氧化成TPA氧www.med126.com化產(chǎn)物。激發(fā)態(tài)的Ru(bpy)₃^2+*在衰減時發(fā)射一個波長為620nm的光子，重新生成基態(tài)的Ru(bpy)₃²⁺。這一過程在電極表面周而復(fù)始地進(jìn)行，產(chǎn)生許多光子，使信號得以增強(qiáng)。