| 公開(公告)號 | CN1439718A |
| 公開(公告)日 | 2003.09.03 |
| 申請(專利)號 | CN03114511.6 |
| 申請日期 | 2003.02.28 |
| 專利名稱 | 一種從蛇毒中分離純化類凝血酶的制備方法 |
| 主分類號 | C12N9/74 |
| 分類號 | C12N9/74;C07K1/18 |
| 分案原申請?zhí)? | |
| 優(yōu)先權 | |
| 申請(專利權)人 | 邊六交;祁淼 |
| 發(fā)明(設計)人 | 邊六交;楊曉燕;董妍;祁淼 |
| 地址 | 710043陜西省西安市高新開發(fā)區(qū)東區(qū)3號4層 |
| 頒證日 | |
| 國際申請 | |
| 進入國家日期 | |
| 專利代理機構 | 西安通大專利代理有限責任公司 |
| 代理人 | 李鄭建 |
| 國省代碼 | 陜西;61 |
| 主權項 | 一種從蛇毒中分離純化類凝血酶的制備方法，其特征在于，采用陽離子交換層析、陰離子交換層析和凝膠排阻層析三步法從蛇毒中分離純化類凝血酶，在帶有梯度洗脫并能同時顯示紫外和電導參數(shù)裝置的高、中、低壓層析儀上進行；性測定參照胰蛋白酶測定法，用BAEE作底物；具體步驟如下：1).選用江浙產蝮蛇抗栓酶的等電點在4～5左右，并選擇在它的等電點附近酸堿度的溶樣液，首先使類凝血酶在溶樣液中以陽離子蛋白質形式存在，然后選擇一種可以與這樣帶電蛋白質特異性結合的陽離子交換介質進行梯度洗脫，收集活性峰；2).陽離子交換收集的含有類凝血酶活性的餾分經稀釋和調pH值后，上陰離子交換柱，稀釋后含NaCl在0.05M以下，pH在8.5左右，陰離子交換層析的A液可選用pH在8.5左右的PBS緩沖液或Tris-HCl緩沖液，B液為在A液中加入0.6-0M左右的NaCl溶液，梯度方式為洗脫液從A液完全變到B液時，至少沖洗10個柱體積以上，介質選擇商品化的陰離子交換介質，收集陰離子層析后含類凝血酶的活性峰；3).將陰離子交換收集的含類凝血酶的活性餾分直接上凝膠層析，收集含類凝血酶的餾分，流動相選用pH5.0-9.0的HAC-NaAC或PBS緩沖液，濃度在10mM-50mM之間，用等度洗脫，介質選用商品化的凝膠介質；4)對最后一步的最大活性峰作SDS-PAGE電泳和HPLC檢測，其純度分別約為98％和95％，脫鹽凍干后可得純類凝血酶。 |
| 摘要 | 本發(fā)明涉及一種從蛇毒中分離純化類凝血酶的方法，采用陽離子交換層析、陰離子交換層析和凝膠排阻層析三步法從蛇毒中分離純化類凝血酶，在帶有梯度洗脫并能同時顯示紫外和電導參數(shù)裝置的高、中、低壓層析儀上進行；性測定參照胰蛋白酶測定法，用BAEE作底物。本發(fā)明可以方便、快速地從蛇毒中提取類凝血酶，其純度和生物活性均可達到藥用標準。與傳統(tǒng)方法相比較，本發(fā)明生產工藝簡單，回收率高，活性損失小，并可幾乎線性放大到工業(yè)規(guī)模化生產。 |
| 國際公布 |
