| 公開(kāi)(公告)號(hào) | CN1206243C |
| 公開(kāi)(公告)日 | 2005.06.15 |
| 申請(qǐng)(專(zhuān)利)號(hào) | CN02103667.5 |
| 申請(qǐng)日期 | 2002.02.08 |
| 專(zhuān)利名稱(chēng) | 豬傳染性胃腸炎病毒卵黃抗體和抗原及其制備 |
| 主分類(lèi)號(hào) | C07K16/02 |
| 分類(lèi)號(hào) | C07K16/02;C07K14/17 |
| 分案原申請(qǐng)?zhí)? | |
| 優(yōu)先權(quán) | |
| 申請(qǐng)(專(zhuān)利權(quán))人 | 北京市農(nóng)林科學(xué)院畜牧獸醫(yī)研究所 |
| 發(fā)明(設(shè)計(jì))人 | 王金洛;徐福州;楊兵;宋維平;;賴(lài)平安;秦澤云 |
| 地址 | 100089 北京市海淀區(qū)西郊板井 |
| 頒證日 | |
| 國(guó)際申請(qǐng) | |
| 進(jìn)入國(guó)家日期 | |
| 專(zhuān)利代理機(jī)構(gòu) | 北京海虹嘉誠(chéng)知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 |
| 代理人 | 張濤;陸濱芊 |
| 國(guó)省代碼 | 北京;11 |
| 主權(quán)項(xiàng) | 一種豬傳染性胃腸炎病毒(TGEV)卵黃抗體，其特征是該抗體是將分離自中國(guó)北京地區(qū)的TGEV病毒分離株作為人工抗原用于免疫非免疫產(chǎn)蛋雞，收集該被免疫的雞所產(chǎn)雞蛋，從其蛋黃中提取的豬傳染性胃腸炎病毒卵黃抗體；所述豬傳染性胃腸炎病毒卵黃抗體的制備方法，包括以下步驟：1)TGEV抗原制備給仔豬口服所述TGEV病毒，攻毒后48小時(shí)出現(xiàn)重度腹瀉時(shí)捕殺，取出小腸組織剪碎研磨，加0.01MPBS稀釋?zhuān)磸?fù)凍融，離心得到純化病毒粒子；將該病毒粒子在豬睪丸(ST)細(xì)胞上增殖，收獲細(xì)胞懸液，反復(fù)凍融三次后離心取上清液繼續(xù)在細(xì)胞上盲傳至第三代出現(xiàn)典型細(xì)胞病變；感染細(xì)胞上清液經(jīng)凍融后離心，濃縮后用作抗原；上述濃縮抗原液，與弗氏完全佐劑乳化后作為首免用免疫原，與弗氏不完全佐劑乳化后作為二免、三免及四免用免疫原；2)免疫用上述制備的免疫原對(duì)非免疫產(chǎn)蛋雞進(jìn)行免疫，程序?yàn)椋菏酌馇?日注射“吸附百日咳菌苗、白喉、破傷風(fēng)類(lèi)毒素”進(jìn)行免疫刺激，首免時(shí)注射免疫原1ml；2周后進(jìn)行二免，注射免疫原1ml；再隔2周進(jìn)行三免，注射免疫原2ml；再隔4周后進(jìn)行第四次免疫，注射免疫原4ml；3)卵黃抗體分離提純首免后6-14周收集所產(chǎn)雞蛋，分離出卵黃，與等量PBS混合后勻漿，測(cè)定抗體效價(jià)，然后用聚乙二醇(PEG-6000)沉淀法提純；所述用聚乙二醇(PEG-6000)沉淀法提純的程序?yàn)椋阂来畏謩e用3.5％PEG-6000、8.5％PEG-6000、12％PEG-6000對(duì)卵黃抗體沉淀3次，最后用預(yù)冷的50％乙醇進(jìn)一步沉淀，得到卵黃抗體提純物。 |
| 摘要 | 本發(fā)明涉及豬傳染性胃腸炎病毒卵黃抗體和抗原及其制備方法。本發(fā)明將豬傳染性胃腸炎病毒在豬睪丸細(xì)胞上增殖后作為免疫原，用于免疫非免疫蛋雞，在收集卵黃并提純的基礎(chǔ)上獲取了可用于治療和預(yù)防豬傳染性胃腸炎病毒的卵黃抗體。使用本發(fā)明的卵黃抗體治療試驗(yàn)攻毒豬，試驗(yàn)組臨床癥狀比對(duì)照組明顯減輕，且試驗(yàn)組的死亡率顯著低于對(duì)照組。將本發(fā)明提供的卵黃抗體在豬傳染性胃腸炎高發(fā)病率的豬場(chǎng)實(shí)地應(yīng)用，也產(chǎn)生了明顯的預(yù)防和治療作用。 |
| 國(guó)際公布 |
