| 公開(kāi)(公告)號(hào) | CN1221285C |
| 公開(kāi)(公告)日 | 2005.10.05 |
| 申請(qǐng)(專利)號(hào) | CN03134626.X |
| 申請(qǐng)日期 | 2003.09.28 |
| 專利名稱 | 肝癌，胃癌和乳腺癌惡性腫瘤基因工程納米疫苗的制備方法 |
| 主分類號(hào) | A61K39/00 |
| 分類號(hào) | A61K39/00;A61K39/39;A61K48/00;A61K9/127;A61K9/107;A61P35/00;C12N15/62 |
| 分案原申請(qǐng)?zhí)? | |
| 優(yōu)先權(quán) | |
| 申請(qǐng)(專利權(quán))人 | 中國(guó)人民解放軍第四軍醫(yī)大學(xué) |
| 發(fā)明(設(shè)計(jì))人 | 隋延仿;葉菁;吳道澄;李增山;;孫玉靜;陳廣生;曲萍 |
| 地址 | 710032 陜西省西安市長(zhǎng)樂(lè)西路17號(hào) |
| 頒證日 | |
| 國(guó)際申請(qǐng) | |
| 進(jìn)入國(guó)家日期 | |
| 專利代理機(jī)構(gòu) | 西安通大專利代理有限責(zé)任公司 |
| 代理人 | 李鄭建 |
| 國(guó)省代碼 | 陜西;61 |
| 主權(quán)項(xiàng) | 一種肝癌、胃癌和乳腺癌惡性腫瘤基因工程納米疫苗的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：1)將腫瘤特異性抗原MAGE-1基因與生物免疫佐劑結(jié)核桿菌熱休克蛋白70即Hsp70基因連接，構(gòu)成MAGE-1～Hsp70融合基因，通過(guò)大腸桿菌進(jìn)行原核表達(dá)，獲得MAGE-1～Hsp70融合蛋白；2)上述MAGE-1～Hsp70融合蛋白表達(dá)產(chǎn)物經(jīng)6M尿素變性，SephadexG-25凝膠色譜柱復(fù)性后，再通過(guò)Ni2+-NTAAgarose親和色譜和ATP-Sepherose4B親和色譜進(jìn)行分離與純化，得到有活性的MAGE-1～Hsp70融合蛋白；3)將有活性的MAGE-1～Hsp70融合蛋白與超抗原葡萄球菌腸毒素A以摩爾數(shù)比為1000∶1組合，構(gòu)成復(fù)合抗原物；4)采用卵磷脂和膽固醇，通過(guò)超聲技術(shù)制備納米脂質(zhì)體，包裹復(fù)合抗原物；5)最后，通過(guò)N-羥基琥珀亞胺酯與Hsp70分子連接，形成N-Hsp70，將N-Hsp70與納米脂質(zhì)體混合，N-Hsp70插入納米脂質(zhì)體磷脂膜外層，構(gòu)成肝癌、胃癌和乳腺癌基因工程納米疫苗。 |
| 摘要 | 本發(fā)明涉及肝癌、胃癌和乳腺癌惡性腫瘤基因工程納米疫苗的制備方法，采用腫瘤特異性共有抗原基因黑色素瘤抗原-1(MAGE-1)和生物免疫佐劑熱休克蛋白70(Hsp70)基因連接，構(gòu)成融合基因(MAGE-1～Hsp70)，通過(guò)大腸桿菌表達(dá)，分離與純化，獲得MAGE-1～Hsp70融合蛋白，經(jīng)變性與復(fù)性，得到高活性的融合蛋白，將此融合蛋白與超抗原葡萄球菌腸毒素A組合，構(gòu)成復(fù)合抗原物。制備納米脂質(zhì)體，包裹復(fù)合抗原物，通過(guò)N-羥基琥珀酰亞胺酯與Hsp70分子連接，形成N-Hsp70，將其插入納米脂質(zhì)體磷脂膜外層，構(gòu)成肝癌、胃癌和乳腺癌惡性腫瘤基因工程納米疫苗。采用本發(fā)明制備的基因工程納米疫苗有以下優(yōu)點(diǎn)：1)采用皮下注射，使用簡(jiǎn)便、安全；2)抗瘤廣譜；3)具有靶向性；4)殺瘤效果強(qiáng)。 |
| 國(guó)際公布 |
