| 公開(公告)號 | CN1232644C |
| 公開(公告)日 | 2005.12.21 |
| 申請(專利)號 | CN98127178.2 |
| 申請日期 | 1998.12.01 |
| 專利名稱 | 細(xì)胞內(nèi)生基因活性化的優(yōu)化方法 |
| 主分類號 | C12N15/63 |
| 分類號 | C12N15/63;C12N15/65;C12N15/79;C12N15/85;C12N5/22 |
| 分案原申請?zhí)? | |
| 優(yōu)先權(quán) | 1997.12.1 EP 97121075.2 |
| 申請(專利權(quán))人 | 羅切診斷學(xué)有限公司 |
| 發(fā)明(設(shè)計)人 | K·豪諾德;T·浩特史克;A·斯特恩 |
| 地址 | 聯(lián)邦德國曼海姆--沃爾德霍夫 |
| 頒證日 | |
| 國際申請 | |
| 進入國家日期 | |
| 專利代理機構(gòu) | 中國國際貿(mào)易促進委員會專利商標(biāo)事務(wù)所 |
| 代理人 | 黃澤雄 |
| 國省代碼 | 德國;DE |
| 主權(quán)項 | 改變內(nèi)生于真核細(xì)胞中的核酸序列表達的方法，其特征是，(a)將載體轉(zhuǎn)入該細(xì)胞，其中包括(i)至少一種選自異源表達控制序列與擴增標(biāo)記基因的序列，(ii)一個正的選擇標(biāo)記基因，(iii)用于部位特異重組酶的，至少兩個位于序列(i)與序列(ii)兩側(cè)的目標(biāo)序列，(iv)在序列(i)、(ii)與(iii)兩側(cè)的DNA序列，它們與細(xì)胞基因組中的核酸片段同源，以便可形成同源的重組，(b)在一定條件下培養(yǎng)該被轉(zhuǎn)入的細(xì)胞，在該條件下可形成載體的同源重組，(c)獲得根據(jù)步驟(b)制得的細(xì)胞。 |
| 摘要 | 本發(fā)明涉及細(xì)胞內(nèi)生基因表達的優(yōu)化方法。首先，涉及一種改變內(nèi)生存在于真核細(xì)胞中的目標(biāo)基因的表達的方法，其中，借助于同源重組作用，把一種異源表達控制序列引入到細(xì)胞的基因組中，而且該方法中還包括使插入的外來DNA的、部位特異重組酶介導(dǎo)的切除，以及用其他的異源表達控制序列或/和擴增標(biāo)記基因代替之；本發(fā)明還涉及把一個或多個在其上結(jié)合存在一個激活因子蛋白質(zhì)或一個激活蛋白質(zhì)復(fù)合物例如一個缺氧誘導(dǎo)因子(HIF)上的核酸序列通過同源重組引入到一個真核細(xì)胞的基因組內(nèi)，以便改變目標(biāo)基因的表達。本發(fā)明還涉及一個通過對報道基因表達的確定，測定在5’部位或3’部位上未編碼的核酸片段對目標(biāo)基因表達的影響的方法。此外，本發(fā)明還涉及一種含有重組酶-目標(biāo)序列的、DHFR-負(fù)真核細(xì)胞的制備方法，以及插入在該重組酶-目標(biāo)序列中的核酸序列的表達。 |
| 國際公布 |
