| 公開(kāi)(公告)號(hào) | CN1246482C |
| 公開(kāi)(公告)日 | 2006.03.22 |
| 申請(qǐng)(專利)號(hào) | CN200410024074.5 |
| 申請(qǐng)日期 | 2004.05.08 |
| 專利名稱 | 單個(gè)核細(xì)胞白細(xì)胞相容性抗原A和B特異核糖核酸檢測(cè)方法 |
| 主分類號(hào) | C12Q1/68(2006.01)I |
| 分類號(hào) | C12Q1/68(2006.01)I |
| 分案原申請(qǐng)?zhí)? | |
| 優(yōu)先權(quán) | |
| 申請(qǐng)(專利權(quán))人 | 山東大學(xué)齊魯醫(yī)院 |
| 發(fā)明(設(shè)計(jì))人 | 鄒 雄;張 義;楊曉靜 |
| 地址 | 250012山東省濟(jì)南市歷下區(qū)文化西路107號(hào) |
| 頒證日 | |
| 國(guó)際申請(qǐng) | |
| 進(jìn)入國(guó)家日期 | |
| 專利代理機(jī)構(gòu) | 山東濟(jì)南齊魯科技專利事務(wù)所有限公司 |
| 代理人 | 宋永麗 |
| 國(guó)省代碼 | 山東;37 |
| 主權(quán)項(xiàng) | 單個(gè)核細(xì)胞白細(xì)胞相容性抗原A和B特異核糖核酸檢測(cè)方法，首先抽取外周血，提取淋巴細(xì)胞，然后對(duì)淋巴細(xì)胞總RNA進(jìn)行鑒定，當(dāng)可見(jiàn)5s，18s，28s，三條清晰條帶，可用于逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)，其特征在于：使逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)體系為25微升，其中逆轉(zhuǎn)錄酶1微升，隨機(jī)引物1微升，Taq酶0.2微升，上下游引物是0.4微升，其中HLA-B和HLA-A引物均是4對(duì)，使用其中任何一對(duì)均可，HLA-B引物是：上游引物5′-CACACTGACCTGGCAGCGGGAT-3′，下游引物：5′-AGAGCCCTGGGCACTGTCGCT-3′，或者HLA-B引物是：上游引物5′-GGGCAGCTGTGGTGCCT-3′，下游引物是5′-CACTGTCGCTGCACGCAGCCT-3′，或者HLA-B引物是：上游引物5′-CTGCCGAAGCCCCTCACCCTCT-3′，下游引物是5′-AGGACCAGACCCAGGACA-3′，或者HLA-B引物是：上游引物5′-GCCGTCTTCCCAGTCCACCGT-3′，下游引物是5′-ATGCCCACGATGGGGACGGT-3′，HLA-A引物是：上游引物5′CTACCCTGCGGAGATCAC-3′，下游引物：5′-AGAGAACCAGGCCAGCAAT-3′，或者HLA-A引物是：上游引物5′-ATGAGGCGGAGCAGTTGA-3′，下游引物5′-ATGGTGGGCTGGGAAGAC-3′，或者HLA-A引物是：上游引物5′-GAGGCGGAGCAGTTGAGA-3′，下游引物5′-GGAAGGGCAGGAACAACTC-3′，或者HLA-A引物是：上游引物5′-GGAGGACCAGACCCAGGACA-3′，下游引物5’-ATGGTGGGCTGGGAAGAC-3’，其中RNA是10微升，得出多聚酶鏈反應(yīng)參數(shù)是42℃30min，95℃3min，94℃1min，55℃1min，72℃1min，5個(gè)循環(huán)，94℃10sec，60℃40sec，40個(gè)循環(huán)，72℃5min，對(duì)擴(kuò)增產(chǎn)物電泳掃描及序列分析，最后進(jìn)行熒光定量檢測(cè)，以引物為基礎(chǔ)合成熒光探針，建立熒光定量逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)，獲得檢測(cè)結(jié)果。 |
| 摘要 | 本發(fā)明是單個(gè)核細(xì)胞白細(xì)胞相容性抗原A和B特異核糖核酸檢測(cè)方法，一、外周血淋巴細(xì)胞(PBL)的提取，二、外周血淋巴細(xì)胞總RNA的鑒定，三、優(yōu)化后的聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)擴(kuò)增體系，四、擴(kuò)增產(chǎn)物的電泳掃描及序列分析，五、熒光定量檢測(cè)。采用本發(fā)明檢測(cè)方法，檢測(cè)結(jié)果是用1-2％瓊脂糖凝膠電泳，正常人在287bp處可見(jiàn)明顯亮帶，免疫力低的人群則明顯減弱或缺失，以此結(jié)果，可以判斷是否是腫瘤患者，若是腫瘤患者篩選生物治療的藥物或治療方法，可以提高腫瘤患者針對(duì)性的治療效果，對(duì)尚未有臨床癥狀的人群，提供應(yīng)當(dāng)增強(qiáng)免疫力的警示，對(duì)研究人員可以提供尋求提高細(xì)胞免疫力的中草藥等。本發(fā)明可以普遍應(yīng)用于健康查體。 |
| 國(guó)際公布 |
