用于治療腫瘤轉(zhuǎn)移的真核表達載體及其構(gòu)建方法
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公開(公告)號
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CN1884554A
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公開(公告)日
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2006.12.27
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申請(專利)號
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CN200610085445.X
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申請日期
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2006.06.16
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專利名稱
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用于治療腫瘤轉(zhuǎn)移的真核表達載體及其構(gòu)建方法
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主分類號
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C12N15/79(2006.01)I
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分類號
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C12N15/79(2006.01)I;C12N15/65(2006.01)I;C12N15/62(2006.01)I;A61K38/57(2006.01)I;A61P35/00(2006.01)I
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分案原申請?zhí)? |
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優(yōu)先權(quán)
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申請(專利權(quán))人
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南京大學(xué)
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發(fā)明(設(shè)計)人
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孫國勛;張辰宇;李朝軍;項 陽
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地址
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210093江蘇省南京市漢口路22號
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頒證日
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國際申請
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進入國家日期
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專利代理機構(gòu)
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南京知識律師事務(wù)所
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代理人
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高桂珍
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國省代碼
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江蘇;32
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主權(quán)項
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一種Bikunin真核細胞表達載體，其特征是該載體表達產(chǎn)物為含有Myc和組氨酸標(biāo)簽的Bikunin融合蛋白。
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摘要
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本發(fā)明屬于生制藥技術(shù)領(lǐng)域，所述構(gòu)建含有Bikunin的真核表達載體pSecTag2B-Bikunin所表達的產(chǎn)物為帶有Myc和組氨酸標(biāo)簽的融合蛋白。本發(fā)明應(yīng)用RT-PCR方法，從人肝細胞系L02擴增Bikunin，將其克隆于pMD18-T SimpleVector中構(gòu)建pMD18-T-Bikunin，經(jīng)酶切、PCR及測序鑒定后，將Bikunin亞克隆至真核表達載體pSecTag 2B中，經(jīng)酶切及PCR鑒定，證明構(gòu)建成功含有Bikunin的真核表達載體pSecTag2B-Bikunin。用磷酸鈣沉淀法轉(zhuǎn)染NIH3T3細胞，24小時后，Western blot檢測濃縮25倍的細胞培養(yǎng)上清，證明有融合蛋白的表達。該蛋白作為生物制劑可用于腫瘤轉(zhuǎn)移的治療。
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國際公布
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