黃氏響聲丸—貝母素乙的測定—薄層掃描法

本方法采用雙波長薄層掃描法測定黃氏響聲丸中貝母素乙(C₂₇H₄₃NO₃)的含量。

本方法適用于中成藥黃氏響聲丸。

供試品加乙醚-氯仿-乙醇，過濾，濾渣用同樣的混合溶液沖洗，合并濾液和洗液，蒸干殘?jiān)�用氯仿溶解，制成供試液，點(diǎn)樣、展開，以碘化鉍鉀溶液顯色，用薄層掃描儀進(jìn)行掃描，于波長λ_S=516nm，λ_R=650nm測量貝母素乙(C₂₇H₄₃NO₃)吸收度積分值，計(jì)算其含量。

1. 乙醚

2乙醇

3. 氯仿

4. 碘化鉍鉀溶液

5. 乙醇

6. 濃氨水

7. 醋酸乙酯

8. 石油醚

9. 甲醇

1. 儀器

1.1 雙波長薄層掃描儀

1.2涂布器

應(yīng)能使吸附劑在玻璃板上手工或自動(dòng)涂成一層符合厚度要求的均勻薄層。

1.3點(diǎn)樣器

一般采用微升毛細(xì)管或與之相應(yīng)的點(diǎn)樣器材。

1.4展開室

可用適合薄層板大小的專用玻璃缸，底部平底或雙槽，蓋子須密閉。

2材料

2.1玻板

用10cm×10cm、10cm×15cm、20cm×10cm或20cm×20cm的規(guī)格，要求光滑、平整，洗凈后不附水珠，晾干。

2.2吸附劑

硅膠G，其顆粒大小一般要求直徑為10～40μm。

1. 對照品溶液的制備

取貝母素乙對照品，加氯仿制成每lmL中含0.5μg的溶液，作為對照品溶液。

2. 供試品溶液的制備

取供試品適量，去糖衣，研細(xì)，過篩，取l0g，精密稱定，加適量硅藻土混合，加7-l0μL濃氨水濕潤，置于100mL量瓶中，加混合溶液乙醚-氯仿-乙醇(25:8:2.5)50mL，混勻，超聲處理30min，冷浸過夜，過濾，濾渣用混合溶液(同上)10mL沖洗三次，合并濾液和洗液，自然揮干，加氯仿少許使殘?jiān)�溶解并定容�?mL，搖勻，作為供試品溶液，同法制備不含貝母的陰性對照液。

注：“精密稱取”系指稱取重量應(yīng)準(zhǔn)確至所稱取重量的千分之一。“精密量取”系指量取體積的準(zhǔn)確度應(yīng)符合國家標(biāo)準(zhǔn)中對該體積移液管的精度要求。

1.薄層板制備

將吸附劑1份和水3份在研缽中向一方向研磨混合，去除表面的氣泡后，倒入涂布器中，在玻板上平穩(wěn)地移動(dòng)涂布器進(jìn)行涂布（厚度為0.25～0.5mm)取下涂好薄層的玻板，于室溫下，置水平臺(tái)上晾干，在反射光及透射光下檢視，表面應(yīng)均勻，平整，無麻點(diǎn)、無氣泡、無破損及污染，于110℃烘30分鐘，冷卻后立即使用或置干燥箱中備用，或用商品預(yù)制板。

2.點(diǎn)樣

吸取上述三種溶液(對照品、供試品、陰性對照品)各4μL、10μL、10μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，如用點(diǎn)樣器點(diǎn)樣到薄層板上，一般為圓點(diǎn)，點(diǎn)樣基線距底邊1.0～1.5cm，樣點(diǎn)直徑一般不大于2mm，點(diǎn)間距離可視斑點(diǎn)擴(kuò)散情況，以不影響檢出為宜。點(diǎn)樣時(shí)必須注意勿損傷薄層表面。

3.展開

將點(diǎn)好樣品的薄層板放入展開缸的展開劑中，以石油醚－醋酸乙酯－甲醇－濃氨水(10:10:2:1)為展開劑，飽和30min，上行展開l0cm，取出，晾干，完全揮去溶媒后，噴以碘化鉍鉀試液顯色，晾干。供試品與對照品在薄層色譜相應(yīng)的位置上，顯相同的黃色斑點(diǎn)；陰性對照品與對照品在薄層色譜相應(yīng)的位置上不出現(xiàn)斑點(diǎn)。

4. 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備

分別吸取對照品溶液2，4，5，6，8μL分別點(diǎn)于同一薄層板上，按上述薄層層析條件，展開、顯色、掃描，以貝母素乙點(diǎn)樣量對斑點(diǎn)面積積分值繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,進(jìn)行直線回歸，得到回歸方程。

5.含量測定

在薄層板上覆蓋同樣大小的玻璃板，周圍用膠布固定，選擇反射方式，采用吸收法，用雙波長進(jìn)行掃描，波長：λ_S =516nm，λ_R=650nm，測量供試品吸收度積分值與對照品吸收度積分值，計(jì)算。

用外標(biāo)法測定時(shí)，若對照品各數(shù)據(jù)點(diǎn)在校正曲線上呈一通過原點(diǎn)的直線時(shí)，可用一點(diǎn)法校正，如不通過原點(diǎn)通常宜采用二點(diǎn)法校正，必要時(shí)用多點(diǎn)法校正。

徐瑋一,楊勤,王洪等.黃氏響聲丸的定量分析.江蘇藥學(xué)與臨床研究,2001,9(2):21-22.