30．20×SSPE溶液
【配制方法】
在800ml水中溶解17.5g NaCl、27.6g NaH2PO4·H2O和7.4g EDTA，用NaOH溶液調(diào)節(jié) pH值至7.4（約需6.5ml 10ml/L NaOH)，加水定容至1L，分裝后高壓滅菌。
31．100%三氯乙酸溶液
【配制方法】
在裝有500g TCA的瓶中加入227ml水，形成的溶液含有100%（M/V)TCA。
32．1mol/L Tris溶液
【配制方法】
在800ml水中溶解121.91g Tris堿，加入濃HCl調(diào)節(jié) pH值至所需值。
pH HCl
7.4 70ml
7.6 60ml
8.0 42ml
應(yīng)使溶液冷至室溫后方可最后調(diào)定pH值，加水定容至1L，分裝后高壓滅菌。
【注意】
如1mol/L溶液呈現(xiàn)黃色，應(yīng)予丟棄并置備質(zhì)量更好的Tris。
盡管多種類型的電極均不能準(zhǔn)確測(cè)量Tris溶液的pH值，但仍可向大多數(shù)廠商購(gòu)得合適的電極。
Tris溶液的pH值因溫度而異，溫度每升高1℃，pH值大約降低0.03個(gè)單位。例如：0.05mol/L的溶液在5℃、25℃、和37℃時(shí)的pH值分別為9.5、8.9和8.6。
33．Tris緩沖鹽溶液（TBS)（25mmol/l Tris)
【配制方法】
在800ml蒸餾水中溶解8g NaCl、0.2g KCl和3g Tris堿，加入0.015g酚并用HCl調(diào)至pH值至7.4，用蒸餾水定容至1L，分裝后在151bf/in2(1.034×105Pa)高壓下蒸汽滅菌20min，于室溫保存。
34．X-gal溶液
【配制方法】
X-gal為5-溴-4-氯-3-吲哚-β-D半乳糖苷。用二基甲酰胺溶解X-gal配制成的20mg/ml的貯存液。保存于一玻璃管或聚丙烯管中，裝有X-gal溶液的試管須用鋁箔封裹以防因受光照而被破壞，并應(yīng)貯存于-20℃。X-gal溶液無(wú)須過(guò)濾除菌。
雜交試驗(yàn)中用于降低背景的封閉劑
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試劑 |
用途 |
| Denhardt試劑 | Northern雜交 |
| 使用RNA探針的雜交 | |
| 單拷貝序列的Southern雜交 | |
| 將DNA固定于尼龍膜上的雜交 | |
| Denhardt試劑通常配制50×貯存液，過(guò)濾后保存于-20℃。可將該貯存液10倍稀釋于預(yù)雜交液（常為含有0.5%SDS和100μg/ml經(jīng)變性被打斷的鮭精DNA的6×SSC或6×SSPE)中。50×Denhardt液中含5g聚蔗糖（Ficoll,400型，Pharmacia)、5g聚乙烯吡咯烷酮和5g牛血清白蛋白（組分V”Sigmal)，加水至終體積為500ml。 | |
| BLOTTO | Grunstein-Hogness雜交 |
| Benton-Davis雜交 | |
| 除單拷貝序列Southern雜交以外的所有Southern雜交 | |
| 斑點(diǎn)印跡 | |
| 1×BLOTT（牛乳轉(zhuǎn)移技術(shù)優(yōu)化液，Bovine Lacto Transfer Technique Optimizer),是含5%膠脂奶粉和0.02%疊氮鈉的水溶液，應(yīng)保存于4℃。使用前可用預(yù)雜交液稀釋25倍。BLOTTO不應(yīng)與高濃度的SDS并用，因?yàn)楹笳邥?huì)導(dǎo)致牛奶中蛋白質(zhì)析出。如果雜交背景不合要求，可在雜交液中加入NP-40至終濃度為1%。BLOTTO不能用作Northern雜交的封閉劑，因?yàn)檫@一封閉劑中可能含有RNA酶，其活性之高使人無(wú)法接受。 | |
| 注意：疊氮鈉有毒性，取用時(shí)需戴手套小心操作。含疊氮鈉的溶液應(yīng)予明確標(biāo)記。 | |
| 肝素 | Southern雜交 |
| 原位雜交 | |
| 肝素（Sigma H-7005，從豬中提取的二級(jí)產(chǎn)品或相當(dāng)?shù)燃?jí)的產(chǎn)品)用4×SSPE或4×SSC溶解配制成50mg/ml的濃度，保存于4℃。肝素在含有葡聚糖硫酸酯的雜交液中用作封閉劑的濃度為500μg/ml，在不含葡聚糖硫酸酯的雜交液中的濃度為50μg/ml。 | |
| 經(jīng)變性并被打斷的鮭精DNA | southern和Northern雜交 |
| 把鮭魚精子DNA（Sigma,Ⅲ,鹽鈉)溶解于水配制成10mg/ml的濃度，必要時(shí)于室溫磁力攪拌2～4h助溶。把溶液中NaCl的濃度調(diào)至0.1mol/L，并用酚和酚/氯仿各抽提一次，回收水相。合DNA溶液快速通17號(hào)皮下注射針頭12次，以剪切DNA。加入2倍體積用冰預(yù)冷的乙醇沉淀DNA。離心回收DNA并重溶于水，配制成10mg/ml的濃度，測(cè)定溶液的OD260值并計(jì)算出精確的DNA濃度，然后煮沸10min，分裝成小份保存于-20℃。使用前置沸水浴中加熱5min，然后迅速在冰浴中驟冷。預(yù)雜交液中應(yīng)含有100μg/ml經(jīng)變性并被打斷的鮭魚精子DNA | |
