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您現(xiàn)在的位置: 醫(yī)學(xué)全在線 > 理論教學(xué) > 基礎(chǔ)學(xué)科 > 免疫細(xì)胞與核酸分子雜交 > 正文:常用貯存液的配制
    

常用貯存液的配制

 

  17.1mol/L乙酸鎂溶液

  【配制方法】

  在800ml水中溶解214.46g四水乙酸鎂,用水定容至1L過濾除菌。

  18.1mol/L MgCl2溶液

  【配制方法】

  在800ml水中溶解203.4g MgCl2·6H2O,用水定容至1L,分裝成小份并高壓滅菌備用。

  【注意】

  MgCl2極易潮解,應(yīng)選購小瓶(如100g)試劑,啟用新瓶后勿長期存放。

  19.β-巰基乙醇(BME)溶液

  【配制方法】

  一般得到的是14.4mol/L溶液,應(yīng)裝在棕色瓶中保存于4℃。

  【注意】

  BME或含有BME的溶液不能高壓處理。

  20.NBT溶液

  【配制方法】

  把0.5g氯化氮藍(lán)四唑溶解于10ml 70%的二甲基甲酰胺中,保存于4℃。

  21.酚/氯仿溶液

  【配制方法】

  把酚和氯仿等體積混合后用0.1mol/L Tris·HCl(pH7.6)抽提幾次以平衡這一混合物,置棕色玻璃瓶中,上面覆蓋等體積的0.01mol/l Tris·HCl(pH7.6)液層,保存于4℃。

  【注意】

  酚腐蝕性很強(qiáng),并可引起嚴(yán)重灼傷,操作時(shí)應(yīng)戴手套及防護(hù)鏡,穿防護(hù)服。所有操作均應(yīng)在化學(xué)通風(fēng)櫥中進(jìn)行。與酚接觸過的部位皮膚應(yīng)用大量的水清洗,并用肥皂和水洗滌,忌用乙醇。

  22.10mmol/L苯甲基磺酰氟(PMSF)溶液

  【配制方法】

  用異丙醇溶解PMSF成1.74mg/ml(10mmol/L),分裝成小份貯存于-20℃。如有必要可配成濃度高達(dá)17.4mg/ml的貯存液(100mmol/L)。

  【注意】

  PMSF嚴(yán)重?fù)p害呼吸道粘膜、眼睛及皮膚,吸入、吞進(jìn)或通過皮膚吸收后有致命危險(xiǎn)。一旦眼睛或皮膚接觸了PMSF,應(yīng)立即用大量水沖洗之。凡被PMSF污染的衣物應(yīng)予丟棄。

  PMSF在水溶液中不穩(wěn)定。應(yīng)在使用前從貯存液中現(xiàn)用現(xiàn)加于裂解緩沖液中。PMSF在水溶液中的活性喪失速率隨pH值的升高而加快,且25℃的失活速率高于4℃。pH值為8.0時(shí),20μmmol/l PMSF水溶液的半壽期大約為85min,這表明將PMSF溶液調(diào)節(jié) 為堿性(pH>8.6)并在室溫放置數(shù)小時(shí)后,可安全地予以丟棄。

  23.磷酸鹽緩沖溶液(PBS)溶液

  【配制方法】

  在800ml蒸餾水中溶解8g NaCl、0.2g KCl、1.44g Na2HPO4和0.24g KH2PO4,用HCl調(diào)節(jié) 溶液的pH值至7.4加水定容至1L,在15lbf/in2(1034×105Pa)高壓下蒸氣滅菌20min。保存于室溫。

  24.1mol/L乙酸鉀(pH7.5)溶液

  【配制方法】

  將9.82g乙酸鉀溶解于90ml純水中,用2mol/L乙酸調(diào)節(jié) pH值至7.5后加入純水定容到1L,保存于-20℃。

  25.乙酸鉀溶液(用于堿裂解)

  【配制方法】

  在60ml 5mol/L乙酸鉀溶液中加入11.5ml冰乙酸和28.5ml水,即成鉀濃度為3mol/L而乙酸根濃度為5mol/L的溶液。

  26.3mol/L乙酸鈉(pH5.2和pH7.0)溶液

  【配制方法】

  在80ml水中溶解408.1g三水乙酸鈉,用冰乙酸調(diào)節(jié) pH值至5.2或用稀乙酸調(diào)節(jié) pH值至7.0,加水定容到1L,分裝后高壓滅菌。

  27.5mol/L NaCl溶液

  【配制方法】

  在800ml水中溶解292.2g NaCl加水定容至1L,分裝后高壓滅菌。

  28.10%十二烷基硫酸鈉(SDS)溶液

  【配制方法】

  在900ml水中溶解100g電泳級(jí)SDS,加熱至68℃助溶,加入幾滴濃鹽酸調(diào)節(jié) 溶液的pH值至7.2,加水定容至1L,分裝備用。

  【注意】

  SDS的微細(xì)晶粒易擴(kuò)散,因此稱量時(shí)要戴面罩,稱量完畢后要清除殘留在稱量工作區(qū)和天平上的SDS,10%SDS溶液無須滅菌。

  29.20×SSC溶液

  【配制方法】

  在800ml水中溶解175.3g NaCl和88.2g檸檬酸鈉,加入數(shù)滴10mol/l NaOH溶液調(diào)節(jié) pH值至7.0,加水定容至1L,分裝后高壓滅菌。

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