1 試劑
1.1 氯仿(A.R)
1.2 辛酸(CP)標(biāo)準(zhǔn)液
用氯仿配成10mg/ml溶液。
1.3 庚酸(CP)內(nèi)示液
用氯仿酸成10mg/ml溶液。
1.41.5mol/L高氯酸溶液
2 儀器
2.1 帶有積分儀及氫火焰檢測(cè)器的氣相色譜儀。
2.2 色譜柱
色譜柱為內(nèi)徑3mm,長2m的玻璃柱,內(nèi)裝涂有10%聚乙二醇(20M)固定液的ChromsorbVV擔(dān)體。
2.3 儀器工作條件
氣化室溫度230℃,柱溫190℃,載氣(純氮)流速40ml/分鐘;樣品,標(biāo)準(zhǔn)液注入量為2μl。
2.4 振蕩器
3 操作
3.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制
取1.2項(xiàng)的辛酸標(biāo)準(zhǔn)液各10、20、30、40及50μl,分別與30μl.3項(xiàng)的庚酸內(nèi)標(biāo)液和4ml的氯仿組成5個(gè)標(biāo)準(zhǔn)管,混合均勻后,在通風(fēng)櫥中將氯仿?lián)]發(fā)至干,然后定量加入0.1ml氯仿溶解殘?jiān)蠙C(jī)測(cè)定。典型的色譜圖中內(nèi)標(biāo)庚酸的保留值為9分鐘左右,辛酸的保留值為13分鐘左右。分別以自動(dòng)積分儀顯示的各管樣品的辛酸和內(nèi)標(biāo)庚酸的峰面積之比,對(duì)各管中所含辛酸加入量進(jìn)行回歸統(tǒng)計(jì),也可得到回歸方程。
3.2 樣品測(cè)定步驟
取已知蛋白濃度樣品,用蒸餾水稀釋至5%蛋白濃度,然后準(zhǔn)確取0.5ml,加入庚酸內(nèi)標(biāo)液30μl,1.5mol m.gydjdsj.org.cn/Article//L高氯酸0.2ml,在振蕩器上混合均勻,然后加入氯仿4ml,加蓋,用振蕩器劇烈混合1分鐘,2800r/min離心10分鐘。用濾紙卷?xiàng)l小心吸去上層水,再用吸管小心吸出氯仿層,移入10ml管子中,在通風(fēng)櫥中待氯仿?lián)]發(fā)至干,精確加入0.1ml氯仿,溶解殘?jiān),上機(jī)測(cè)定。
4 計(jì)算
4.1 m.gydjdsj.org.cn/sanji/根據(jù)樣品測(cè)定時(shí)所得的辛酸與內(nèi)標(biāo)庚酸的峰面積比代入已得回歸方程,即得辛酸絕對(duì)含量。
白蛋白中辛酸量(mmol /g蛋白)=測(cè)得辛酸絕對(duì)量(μg)/144.22×0.5×樣品蛋白濃度×100
注:
1.辛酸量(mmol)相等于辛酸鈉量(mmol)。
2.辛酸分子量為144.22。