藥物分析實(shí)驗(yàn)講義 (供藥學(xué)本科用) 皖南醫(yī)學(xué)院藥學(xué)系 二00六年十二月六日 緒 論 實(shí)驗(yàn)?zāi)康?/B> 藥品是用于診斷、預(yù)防、治療疾病，增強(qiáng)體質(zhì)的一種特殊商品，藥品質(zhì)量好壞直接關(guān)系到用藥的安全、有效，關(guān)系到人的健康與生命安全。因此，為了確保用藥的安全、合理、有效，必須從藥品的研制、生產(chǎn)、供應(yīng)和使用等過程全面控制藥品質(zhì)量。 《藥物分析》是一門綜合性應(yīng)用學(xué)科，其實(shí)踐性很強(qiáng)�！端幬锓治鰧�(shí)驗(yàn)》是運(yùn)用各種科學(xué)方法、分析技術(shù)，研究和檢驗(yàn)各種藥物(天然藥物、化學(xué)合成藥物、抗生素、生化藥物等)及其制劑質(zhì)量的實(shí)踐性課程，是《藥物分析》課程教學(xué)的重要組成部分。其內(nèi)容主要是各種分析方法在藥物分析中的實(shí)際應(yīng)用，此外，還包括藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的制訂以及分析方法評(píng)價(jià)等。 《藥物分析實(shí)驗(yàn)》課程旨在培養(yǎng)學(xué)生的實(shí)際動(dòng)手能力、書面表達(dá)能力以及科學(xué)思維能力，培養(yǎng)學(xué)生嚴(yán)肅認(rèn)真、實(shí)事求是的科學(xué)態(tài)度，培養(yǎng)學(xué)生獨(dú)立開展藥物分析工作的能力。通過《藥物分析實(shí)驗(yàn)》課程的教學(xué)，要求學(xué)生認(rèn)真驗(yàn)證理論課講授的相關(guān)藥物分析理論，加深對(duì)藥物分析學(xué)科基本理論和專業(yè)知識(shí)的認(rèn)識(shí)與理解，熟悉《中國(guó)藥典》常用的分析方法和實(shí)驗(yàn)技術(shù)的基本原理，正確掌握各種分析方法的操作技術(shù)，熟悉常用分析儀器的正確使用方法，為從事藥品質(zhì)量研究與檢驗(yàn)、新藥研究開發(fā)、臨床藥物分析等工作奠定堅(jiān)實(shí)的基礎(chǔ)。 實(shí)驗(yàn)要求 扎實(shí)的基本操作技能是進(jìn)行藥品質(zhì)量控制工作與科學(xué)研究的基本條件，學(xué)生應(yīng)該珍惜實(shí)驗(yàn)課程的實(shí)際訓(xùn)練機(jī)會(huì)，實(shí)驗(yàn)過程中仔細(xì)、認(rèn)真，勤動(dòng)手，在整個(gè)藥物分析實(shí)驗(yàn)課教學(xué)過程中，應(yīng)該做到： 1.通過實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證藥物分析的基本理論，加深對(duì)專業(yè)知識(shí)的理解。 2.復(fù)習(xí)實(shí)驗(yàn)教材中各類代表性藥物的分析方法，熟練掌握各種分析的操作技術(shù)。 3.培養(yǎng)獨(dú)立開展藥物分析的能力。 4.養(yǎng)成嚴(yán)肅認(rèn)真的工作作風(fēng)和實(shí)事求是的工作態(tài)度。 5.原始記錄是實(shí)驗(yàn)報(bào)告的重要組成部分，養(yǎng)成尊重原始記錄的科學(xué)態(tài)度。 具體到每一節(jié)實(shí)驗(yàn)課，參加實(shí)驗(yàn)課教學(xué)的學(xué)生必須做到： 一、課前做好預(yù)習(xí)工作 課前應(yīng)復(fù)習(xí)理論課上講解過的實(shí)驗(yàn)原理與操作要點(diǎn)，明確該次實(shí)驗(yàn)的目的與要求。 預(yù)先熟悉實(shí)驗(yàn)內(nèi)容、步驟、方法，推導(dǎo)實(shí)驗(yàn)中涉及的計(jì)算公式。 盡量找出實(shí)驗(yàn)可能的誤差來源及消除方法，預(yù)估實(shí)驗(yàn)中可能發(fā)生的問題及處理辦法。 二、課中仔細(xì)認(rèn)真操作 1.實(shí)驗(yàn)中一定要確保安全。使用水、火、煤氣及易燃、易爆、有毒、腐蝕性試劑時(shí)應(yīng)特別小心。時(shí)刻注意防火、防爆。保證實(shí)驗(yàn)室氣流通暢。發(fā)現(xiàn)事故苗頭(如聞到煤氣味、發(fā)現(xiàn)電路線上有火花、異常的焦糊味等)或發(fā)生事故時(shí)及時(shí)報(bào)告，不懂時(shí)千萬(wàn)不要擅自處理。 2.開始實(shí)驗(yàn)操作后，要隨身攜帶一本編有頁(yè)碼的實(shí)驗(yàn)記錄本，實(shí)驗(yàn)過程中，應(yīng)及時(shí)、準(zhǔn)確、完整地記錄原始數(shù)據(jù)、現(xiàn)象及操作。實(shí)驗(yàn)記錄應(yīng)忠于事實(shí)，如實(shí)地反應(yīng)實(shí)驗(yàn)中的操作、現(xiàn)象、數(shù)據(jù)等，不得編造或篡改。實(shí)驗(yàn)記錄不得用鉛筆書寫，可用鋼筆或圓珠筆書寫，要求字跡清楚。實(shí)驗(yàn)記錄本絕對(duì)不準(zhǔn)撕頁(yè)。實(shí)驗(yàn)記錄本絕對(duì)不得涂改，涂改的原始記錄將視為無效，如實(shí)驗(yàn)記錄有誤，以能看清原來寫錯(cuò)的記錄為基礎(chǔ)，可在寫錯(cuò)處打上雙橫線，在旁邊空白處寫上正確記錄。原始記錄應(yīng)直接記于實(shí)驗(yàn)記錄本上，決不允許記在紙條上、稱量紙上、濾紙上、手掌上，也不允許記在其他本子上再謄寫，更不允許暫時(shí)記在腦子里等有空時(shí)一起記錄。 3.實(shí)驗(yàn)中應(yīng)仔細(xì)、認(rèn)真，要嚴(yán)格按照實(shí)驗(yàn)規(guī)程操作，認(rèn)真練習(xí)操作技術(shù)，細(xì)心觀察實(shí)驗(yàn)現(xiàn)象，如實(shí)記錄原始數(shù)據(jù)，出現(xiàn)問題時(shí)及時(shí)咨詢代教教師。 4.愛護(hù)公物，節(jié)約使用，移物歸位。小心使用儀器，損壞儀器應(yīng)及時(shí)報(bào)損、登記，精密儀器用畢應(yīng)登記簽名。公用儀器、藥品或試劑應(yīng)在指定位置取用，不要拿回自己實(shí)驗(yàn)臺(tái)處。殘液應(yīng)倒入指定的廢液缸中，切勿直接倒入水槽。可回收利用的廢溶劑應(yīng)回收到指定容器中。 5.實(shí)驗(yàn)中注意避免試劑及藥品的污染。取用時(shí)仔細(xì)觀察標(biāo)簽，取出的試劑與藥品不要再倒回原瓶，取用完畢應(yīng)隨手加蓋，不要蓋錯(cuò)瓶蓋。若操作不當(dāng)，發(fā)生試劑或藥品污染，應(yīng)按規(guī)定及時(shí)處理并立即報(bào)告老師。 6.實(shí)驗(yàn)課不得曠課，未經(jīng)允許不得私下相互調(diào)課，實(shí)驗(yàn)期間不得擅自離開實(shí)驗(yàn)室；進(jìn)行講義指定內(nèi)容以外的實(shí)驗(yàn)或重做實(shí)驗(yàn)須經(jīng)老師批準(zhǔn)。 三、課后及時(shí)清理臺(tái)面，總結(jié)實(shí)驗(yàn) 1.實(shí)驗(yàn)完畢應(yīng)立刻清理：電子儀器關(guān)閉，拔去電源插頭，放于指定位置；玻璃儀器按要求洗凈后放回原處；剩余試劑藥品按規(guī)定處理，擦凈實(shí)驗(yàn)臺(tái)面，洗液蓋好瓶蓋收放妥當(dāng)；抹布、刷子洗凈置于原處，幾凳櫥柜整理歸位。經(jīng)老師同意后離開實(shí)驗(yàn)室。 2.值日生應(yīng)負(fù)責(zé)整理公用試劑臺(tái)面及公用試劑，處理廢液缸中的廢液，打掃地面衛(wèi)生，清除垃圾，檢查水、電、煤、門窗等安全事宜，經(jīng)老師同意后離開實(shí)驗(yàn)室。 3.認(rèn)真總結(jié)實(shí)驗(yàn)結(jié)果，得出相應(yīng)結(jié)論，按指定格式填寫實(shí)驗(yàn)報(bào)告并于規(guī)定時(shí)間上交。 實(shí)驗(yàn)室安全守則 在藥物分析實(shí)驗(yàn)中，頻繁使用水、電、煤氣，經(jīng)常使用腐蝕性、易燃、易爆或有毒的化學(xué)試劑，大量使用易損的玻璃儀器，常常使用電子儀器，有時(shí)還會(huì)使用高壓氣體鋼瓶，為確保實(shí)驗(yàn)正常進(jìn)行，保證實(shí)驗(yàn)人員的人身安全，在實(shí)驗(yàn)過程中，必須嚴(yán)格遵守以下實(shí)驗(yàn)室安全守則： 1.進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室，應(yīng)著實(shí)驗(yàn)服、戴實(shí)驗(yàn)帽(長(zhǎng)發(fā)者應(yīng)將長(zhǎng)發(fā)攏于實(shí)驗(yàn)帽內(nèi))，進(jìn)行具有一定危險(xiǎn)性的實(shí)驗(yàn)(如氧瓶燃燒實(shí)驗(yàn))時(shí)，應(yīng)穿戴防護(hù)衣物(如防護(hù)眼鏡、防護(hù)面具、防護(hù)口罩、防護(hù)手套)。 2.嚴(yán)禁在實(shí)驗(yàn)室內(nèi)飲食，吸煙；嚴(yán)禁將飲用水、食物帶入實(shí)驗(yàn)室放置；嚴(yán)禁以實(shí)驗(yàn)用容器代替水杯、餐具使用；任何試劑、藥品不能觸及皮膚，固體藥品應(yīng)以藥匙取用，不得用手抓取，任何試劑、藥品不能直接聞味，不得入口嘗試；實(shí)驗(yàn)完畢，必須洗凈雙手。 3.進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室后應(yīng)盡快熟悉實(shí)驗(yàn)室環(huán)境，確定水、電、煤氣的閥門位置、掌握其開關(guān)方法。水、電、煤氣一經(jīng)使用完畢，應(yīng)立即關(guān)閉水龍頭、煤氣開關(guān)，拔掉電插頭。遇到停水時(shí)應(yīng)立即關(guān)閉水龍頭，以防來水后跑水。冷凝裝置使用完畢后，應(yīng)及時(shí)關(guān)閉冷卻水。使用電器設(shè)備時(shí)，應(yīng)特別仔細(xì)，切不可用潮濕的手或?qū)щ娢锲放鲇|電閘、電器開關(guān)及其他帶電儀器。已經(jīng)確定漏電的電器絕對(duì)不得使用，以免觸電。電器或?qū)Ь�著火時(shí)，首先應(yīng)立刻切斷電源，再行滅火，滅火可采用沙、二氧化碳滅火器或干粉滅火器，禁止使用水或泡沫滅火器等導(dǎo)電液體滅火。離開實(shí)驗(yàn)室時(shí)，應(yīng)再次確認(rèn)已關(guān)閉水、電、煤氣的開關(guān)。 4.酒精燈應(yīng)以火柴點(diǎn)燃，不得直接接火，以免酒精溢出引燃。點(diǎn)燃的火柴使用后立即熄滅。酒精燈使用完畢后，立刻用燈帽蓋上，不得用口吹滅。用試管加熱藥品時(shí)，管口不準(zhǔn)朝向任何人，以免藥品噴出傷人。實(shí)驗(yàn)過程中萬(wàn)一發(fā)生火災(zāi)，不要驚慌，首先盡快切斷電源或燃?xì)庠�，再根�?jù)起火原因針對(duì)性滅火：①酒精及其他可溶于水的液體著火時(shí)，可用水滅火。②有機(jī)溶劑或油類著火時(shí)，絕對(duì)不能用水滅火，這反而會(huì)造成火勢(shì)蔓延，應(yīng)用沙土隔絕氧氣撲滅火焰。③衣服著火時(shí)，切忌奔跑，應(yīng)就地躺下滾動(dòng)，同時(shí)用濕洗衣服在身上抽打滅火。如果發(fā)生燙傷，應(yīng)在實(shí)驗(yàn)室簡(jiǎn)單處理后去醫(yī)院醫(yī)治。但嚴(yán)重者應(yīng)立刻送醫(yī)院治療。 5.使用濃酸、濃堿及其他具有強(qiáng)烈腐蝕性的試劑時(shí)，應(yīng)特別小心，切勿濺在皮膚或衣服上，眼睛更應(yīng)注意保護(hù)。 6.一些有機(jī)溶劑(如乙醚、乙醇、丙酮、苯、三氯甲烷等)極易引燃，必須遠(yuǎn)離明火與熱源(如電爐)。 7.使用玻璃儀器時(shí)應(yīng)注意輕拿經(jīng)放，以免破損造成傷害。 實(shí)驗(yàn)一 巴比妥類藥物的鑒別及含量測(cè)定 一、目的要求 1.掌握巴比妥類藥物的化學(xué)結(jié)構(gòu)與分析方法的關(guān)系，正確鑒別和區(qū)別該類中常用藥物。 2.熟悉巴比妥類藥物的紫外分光光度法的含量測(cè)定。 二、儀器及試藥 （一)鑒別試驗(yàn) 1.試劑：碳酸鈉，硝酸銀，濃硫酸，亞硝酸鈉，巴比妥，蒸餾水。 2.器材：玻棒，燒杯，量筒，標(biāo)簽紙，藥物天平，稱量瓶，稱量紙，小鋼勺。 （二)巴比妥及含硫巴比妥區(qū)別試驗(yàn) 1.試劑：硫酸銅，吡啶，巴比妥，蒸餾水。 2.器材：玻璃棒，燒杯，量筒，白口瓶，標(biāo)簽紙，藥物天平，稱量瓶，稱量紙，小鋼勺。 三、實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備 1. 碳酸鈉試液：取一水合碳酸鈉12.5g或無水碳酸鈉10.5g,加水使溶解成100ml,即得。 2.硝酸銀試液：取硝酸銀17.5g，加水適量使溶解成1000ml，搖勻。置玻璃塞的棕色瓶中，密閉保存。 3. 加吡啶溶液（1→10):取吡啶1ml，加水稀釋至10ml，即得。 4. 銅吡啶試液：取硫酸銅4g，加水90ml溶解后，加吡啶30ml，即得。本液應(yīng)臨用新制。 5. 甲醛試液：可取用“甲醛溶液”。 6. 0.1mol/L氯化鉀溶液：取7.45g氯化鉀，加水1000ml,即得。 7. 氫氧化鈉飽和溶液：取氫氧化鈉適量，加水振搖使溶解成飽和溶液，冷卻后，置聚乙烯塑料瓶中，靜置數(shù)日，澄清后備用。 8. 0.1mol/L氫氧化鈉溶液:取澄清的氫氧化鈉飽和溶液5.6ml，加新沸過的冷水使成1000ml。搖勻。 9. 硼酸－氯化鉀緩m.gydjdsj.org.cn沖液(pH9.0):取硼酸3.09g,加0.1mol/L氯化鉀溶液500ml使溶解，再加0.1mol/L氫氧化鈉溶液210ml，即得。 四、實(shí)驗(yàn)原理及方法 (一)鑒別 1．銀鹽反應(yīng) 巴比妥類藥物在適當(dāng)?shù)膲A性溶液中，遇過量硝酸銀試液，即產(chǎn)生白色的二銀鹽沉淀。
2．銅鹽反應(yīng) 因巴比妥藥物分子中含有－CONHCONHCO－基團(tuán)，可互變異構(gòu)成烯醇型，與銅鹽在堿性溶液中作用，產(chǎn)生類似雙縮脲的顏色反應(yīng)。與硫酸銅、吡啶的反應(yīng)式如下： 反應(yīng)后，巴比妥類藥物顯紫色或產(chǎn)生紫色沉淀。 (二) 巴比妥的含量測(cè)定 實(shí)驗(yàn)原理：巴比妥類藥物如巴比妥在酸性介質(zhì)中幾乎不電離，無明顯的紫外吸收。但在堿性介質(zhì)中電離為具有紫外吸收特征的結(jié)構(gòu)，因而可采用紫外分光光度法測(cè)定其含量。 實(shí)驗(yàn)方法：取本品，精密稱定，加pH9.4的磷酸鹽緩沖溶液溶解并定量稀釋制成每1ml 中含10μg的溶液。照分光光度法（附錄Ⅳ A)，在240nm 的波長(zhǎng)處測(cè)定吸收度，按巴比妥(C8H12N2O3)的吸收系數(shù)（ )為538計(jì)算，即得。 五、注意事項(xiàng) 1．注意選用適當(dāng)儀器進(jìn)行鑒別反應(yīng)。 2．銅鹽反應(yīng)操作中注意防止過量堿的干擾，供試品溶液中每加硫酸銅試液1 滴后，馬上觀察產(chǎn)生沉淀的顏色變化過程并及時(shí)記錄。 六、計(jì)算 巴比妥的百分含量： 式中，A為吸收度， 為百分吸收系數(shù)，l為溶液厚度。 七、思考題 1．常用哪些方法鑒別巴比妥類藥物？ 2．用紫外分光光度法分析巴比妥類藥物時(shí)，定性、定量的依據(jù)是什么？定量時(shí)為什么在不同pH值溶液中測(cè)定其吸收度？ 實(shí)驗(yàn)二 藥品的雜質(zhì)檢查 一、目的要求 1.掌握一般雜質(zhì)檢查的目的和原理，熟悉雜質(zhì)檢查的操作方法。 2.了解某些藥物中特殊雜質(zhì)的檢查意義，并掌握其操作方法。 二、儀器及試藥 (一)葡萄糖中一般雜質(zhì)的檢查 （1)酸度及澄清度檢查 1.試劑：酚酞，氫氧化鈉，比色用氯化鈷，比色用硫酸銅，比色用三氯化鐵，蒸餾水。 2.器材：燒杯，藥物天平，標(biāo)簽紙，稱量瓶，比色管，稱量紙，小鋼勺。 （2)氯化物及硫酸鹽的檢查 1.試劑：硝酸，硝酸銀，標(biāo)準(zhǔn)氯化鈉，鹽酸，氯化鋇，標(biāo)準(zhǔn)硫酸鉀，蒸餾水。 2.器材：燒杯，藥物天平，玻棒，比色管，水浴鍋，稱量紙。 (二)乙酰水楊酸中游離水楊酸的檢查 1.試劑：乙酰水楊酸，95%乙醇，鹽酸，硫酸鐵銨，水楊酸標(biāo)準(zhǔn)品，冰醋酸，蒸餾水。 2.器材：容量瓶，比色管，分析天平，量筒，玻璃棒，燒杯，吸量管，膠頭滴管。 三、實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備 1.酚酞指示液：取酚酞1g，加乙醇100ml使溶解，即得。 2.氫氧化鈉液（0.02mol／L)：取氫氧化鈉8.6g，加水使溶解成100ml，即得。 3.標(biāo)準(zhǔn)比色液：精密量取比色用氯化鉆液10ml，比色用三氯化鐵液30ml 與比色用硫酸銅20ml，加水稀釋成100ml 4.稀硝酸：取硝酸105ml，加水稀釋至1000ml，即得。本液含HNO3應(yīng)為9.5％～10.5％。 5.硝酸銀試液：取硝酸銀17.5g，加水適量使溶解成1000ml，搖勻。置玻璃塞的棕色玻璃瓶中，密閉保存。 6.標(biāo)準(zhǔn)氯化鈉溶液的制備:稱取氯化鈉0.165g，置1000ml量瓶中，加水適量使溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為貯備液。臨用前，精密量取貯備液10ml，置100ml量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，即得(每1ml相當(dāng)于10μg的Cl)。 7.稀鹽酸：取鹽酸234ml，加水稀釋至1000ml，即得。本液含HCl應(yīng)為9.5％～10.5％。 8.25％氯化鋇溶液：取氯化鋇的細(xì)粉25g，加水使溶解成100ml，即得。 9.標(biāo)準(zhǔn)硫酸鉀溶液：稱取硫酸鉀0.181g，置1000ml量瓶中，加水適量使溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得（每1ml相當(dāng)于100μg的SO4)。 10.新制的稀硫酸鐵銨溶液：取1mol／L 鹽酸液1ml 加硫酸鐵銨2ml 后，再加水適量使成100ml。 11.水楊酸對(duì)照液：精密稱取水楊酸0.1g，加水溶解后，加冰醋酸1ml，搖勻，再加水使成1000ml，搖勻。 四、實(shí)驗(yàn)原理及方法 (一)葡萄糖中一般雜質(zhì)的檢查 1．溶液的澄清度與顏色： 取本品25g，加熱水溶解后；放冷，用水稀釋到50ml，溶液應(yīng)澄清無色，如顯色，與對(duì)照液（精密量取比色用氯化鉆液10ml，比色用三氯化鐵液30ml 與比色用硫酸銅20ml，加水稀釋成100ml)2.0ml 加水稀釋至50ml 比較，不得更深。 2．氯化物： 取本品0.6g，加水溶解使成25ml（如顯堿性可滴加硝酸使成中性)，再加稀硝酸10ml。溶液如不澄清，濾過，置50ml 納氏比色管中，加水使成約40ml,加硝酸銀試液1ml，用水稀釋成50ml 搖勻，在暗處放置5 分鐘。如發(fā)生混濁，與標(biāo)準(zhǔn)氯化鈉溶液一定量制成的對(duì)照液（取標(biāo)準(zhǔn)氯化鈉溶液10μg／ml)6ml 置50ml 的納氏比色管中，加稀硝酸10ml ，用水稀釋成約40ml。加硝酸銀試液1ml，再加水適量使成50ml，搖勻，在暗處放置5 分鐘比較不得更濃（0.01%)。 3．硫酸鹽： 取本品2g，加水溶解使成20ml（如顯堿性，可滴加稀鹽酸使成中牲)，溶液如不澄清濾過置50ml 納氏比色管中，加水適量稀釋使成25ml，再加稀鹽酸1ml 置30～50 ℃水浴中保溫10 分鐘，加25％氯化鋇溶液3ml,搖勻；放置10 分鐘，如發(fā)生混濁，與標(biāo)準(zhǔn)硫酸鉀溶液一定量制成的對(duì)照液（取標(biāo)準(zhǔn)硫酸鉀溶液100ug／ml)2ml 置50ml 納氏比色管中，加水稀釋使成25ml，加稀鹽酸lml，置30～50℃ 水浴中保溫10 分鐘，加25％氯化鋇溶液3ml，搖勻，放置10 分鐘比較，不得更濃（0.01％)。 (二)乙酰水楊酸中游離水楊酸的檢查 1.合成工藝及水楊酸的來源 (1)合成工藝： （2)水楊酸的來源：由生產(chǎn)過程中乙�；煌耆蛸A藏過程中水解產(chǎn)生。水楊酸對(duì)人體有毒性，而且分子中酚羥基在空氣中被逐漸氧化成一系列醌型有色物質(zhì)，如淡黃、紅棕甚至深棕色，使阿司匹林成品變色。 2.檢查原理：利用阿司匹林結(jié)構(gòu)中無酚羥基，不能與高鐵鹽作用，而水楊酸則可與高鐵鹽反應(yīng)生成紫堇色，與一定量水楊酸對(duì)照液生成的色澤比較，從而控制游離水楊酸的限量。 3.方法：取本品0.1g．加乙醇1ml 溶解后，加冷水適量使成50ml 立即加新制的稀硫酸鐵銨溶液（取1mol／L 鹽酸液1ml 加硫酸鐵銨2ml 后，再加水適量使成100ml)，搖勻，30 秒鐘內(nèi)。如顯色與對(duì)照液（精密稱取水楊酸0.1g，加水溶解后，加冰醋酸1ml，搖勻，再加水使成1000ml，搖勻)精密量取lml，加乙醇1ml，水48ml 與上述新制的硫酸鐵銨溶液1ml，搖勻比較。不得更深（0.1%)。 五、注意事項(xiàng) 1.納氏比色管的選擇與洗滌： (1)比色或比濁操作，一般均在納氏比色管中進(jìn)行，因此在選用比色管時(shí)，必須注意使樣品與標(biāo)準(zhǔn)管的體積相等，玻璃色質(zhì)一致，最好不帶任何顏色，管上刻度均勻，如有差別，不得相差2mm。 (2)比色管洗滌時(shí)避免用毛刷或去污粉等洗刷，以免管壁上劃出條痕，影響比色或比濁。 2.平行原則：比色或比濁時(shí)，樣品液與標(biāo)準(zhǔn)液的實(shí)驗(yàn)條件應(yīng)盡可能一致，平行操作。 3.嚴(yán)格按操作步驟進(jìn)行試驗(yàn)，注意各種試劑的加入順序。如氯化物的檢查時(shí)，加適量蒸餾水使成約40ml后，再加入AgNO3試液。 4.比色、比濁前應(yīng)使比色管內(nèi)試劑充分混勻，主要是利用手腕轉(zhuǎn)動(dòng)360。的旋轉(zhuǎn)操作來完成。比色方法是將兩管同置于白色背景上，從側(cè)面觀察。比濁方法是將兩管同置于黑色或白色背景上，自上而下觀察。 六、計(jì)算 限量計(jì)算： 式中V標(biāo)準(zhǔn)為標(biāo)準(zhǔn)液體積，C標(biāo)準(zhǔn)為標(biāo)準(zhǔn)液濃度，W樣為樣品取樣量 七、思考題 1.本實(shí)驗(yàn)中檢查的雜質(zhì)屬于哪種雜質(zhì)？檢查的目的是什么？ 2.氯化物的檢查中，為什么宜在硝酸酸性溶液中進(jìn)行？ 3.硫酸鹽檢查法適宜比濁濃度范圍？供試品溶液為何加鹽酸成酸性？ 4.乙酰水楊酸中游離水楊酸檢查的基本原理是什么？ 5.根據(jù)本實(shí)驗(yàn)操作，計(jì)算葡萄糖中氯化物、硫酸鹽的雜質(zhì)限量規(guī)定及乙酰水楊酸中水楊酸的限量。 實(shí)驗(yàn)三 鹽酸普魯卡因注射液的鑒別、檢查 一、目的要求 1、掌握鹽酸普魯卡因注射液的鑒別及檢查方法。 2、了解鹽酸普魯卡因鑒別中的各種現(xiàn)象。 二、儀器及試藥 1．試劑：鹽酸普魯卡因注射液，對(duì)氨基苯甲酸對(duì)照品，二次蒸餾水，紅色石蕊試紙，10%氫氧化鈉溶液，對(duì)二甲氨基苯甲醛溶液。 2．器材：電分析天平，錐形瓶，薄層板，薄層色譜展開缸，變色噴霧瓶。 三、實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備： 1.10%氫氧化鈉溶液：取氫氧化鈉10g，加水至100ml即得。 2.對(duì)氨基苯甲酸對(duì)照品：加乙醇制成每1ml 中含30μg 的溶液。 3.展開劑：苯－冰醋酸－丙酮－甲醇（14：1：1：4) 4.對(duì)二甲氨基苯甲醛溶液：2%對(duì)二甲氨基苯甲醛乙醇溶液100ml，加入冰醋酸5ml 制成。 四、實(shí)驗(yàn)原理及方法 （一)鹽酸普魯卡因的鑒別：取本品約0.1g，加水2ml 溶解后，加10％氫氧化鈉溶液1ml,即生成白色沉淀；加熱，變?yōu)橛蜖钗铮焕^續(xù)加熱，發(fā)生的蒸氣能使?jié)駶?rùn)的紅色石蕊試紙變?yōu)樗{(lán)色；熱至油狀物消失后，放冷，加鹽酸酸化，即析出白色沉淀。 (二) 鹽酸普魯卡因注射液中對(duì)氨基苯甲酸的檢查 精密量取本品，加乙醇稀釋使成每1ml 中含鹽酸普魯卡因25mg 的溶液，作為供試品溶液。另取對(duì)氨基苯甲酸對(duì)照品，加乙醇制成每1ml 中含30μg 的溶液，作為對(duì)照品溶液。照薄層層析法（2005 版藥典附錄)試驗(yàn)，吸收上述兩種溶液各lμl, 分別點(diǎn)于合有羧甲基纖維素鈉為粘合劑的硅膠H 薄層板上；用苯－冰醋酸－丙酮－甲醇（14：1：1：4)為展開劑，展開后取出晾干，用對(duì)二甲氨基苯甲醛溶液（2%對(duì)二甲氨基苯甲醛乙醇溶液100ml，加入冰醋酸5ml 制成)噴霧顯色，供試溶液如顯與對(duì)照品相應(yīng)的雜質(zhì)斑點(diǎn)，與對(duì)照品溶液的主班點(diǎn)比較，不得更深（1.2%)。 五、注意事項(xiàng) 1.點(diǎn)樣量不宜過多，否則會(huì)拖尾分離不好。 2.展開劑不要加得過多，起始線切勿浸入展開劑中。 3.展開槽與薄層板用展開劑蒸氣預(yù)飽和，消除邊緣效應(yīng)。 六、計(jì)算 限量計(jì)算： 式中V標(biāo)準(zhǔn)為標(biāo)準(zhǔn)液體積，C標(biāo)準(zhǔn)為標(biāo)準(zhǔn)液濃度，W樣為樣品取樣量 七、思考題 1.解釋鹽酸普魯卡因鑒別中產(chǎn)生各種現(xiàn)象的原因。 2.什么叫邊緣效應(yīng)？ 實(shí)驗(yàn)四 水楊酸鈉的含量測(cè)定（雙相滴定法) 一、目的要求 掌握雙相滴定法的基本原理操作。 二、儀器及試藥 1．試劑：水楊酸鈉，二次蒸餾水，乙醚，甲基橙指示劑，0.1mol/L鹽酸； 2．器材：電分析天平，分液漏斗，具塞錐形瓶，酸堿滴定裝置，石英二次水蒸餾器。 三、實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備 1.甲基橙指示液：取甲基橙0.1g，加水100ml使溶解，即得。 2.鹽酸滴定液(0.1mol/L)：取鹽酸9.0ml， 加水適量使成1000ml，搖勻�！ � 3.鹽酸滴定液(0.1mol/L)的標(biāo)定：取在270～300℃干燥至恒重的基準(zhǔn)無水碳酸鈉約0.15g，精密稱定，加水50ml使溶解，加甲基紅－溴甲酚綠混合指示液10滴，用本液滴定至溶液由綠色轉(zhuǎn)變?yōu)樽霞t色時(shí)，煮沸2分鐘,冷卻至室溫，繼續(xù)滴定至溶液由綠色變?yōu)榘底仙�。�?ml鹽酸滴定液(0.1mol/L)相當(dāng)于5.30mg的無水碳酸鈉。根據(jù)本液的消耗量與無水碳酸鈉的取用量，算出本液的濃度，即得。 4.甲基紅－溴甲酚綠混合指示液:取0.1％甲基紅的乙醇溶液20ml，加0.2％溴甲酚綠的乙醇溶液30ml，搖勻，即得。 四、實(shí)驗(yàn)原理及方法 (一)原理：本品為白色顆粒，粉未或結(jié)晶性粉末，在水中易溶。本實(shí)驗(yàn)采用在水-醚二相中，用標(biāo)準(zhǔn)酸液直接滴定。由于滴定過程中生成的游離酸不溶解于水而妨礙終點(diǎn)的觀察指示劑的顏色變化。因此，將精密稱量的樣品置于分液漏斗中，加水溶解后，以甲基橙為指示劑，加入有機(jī)溶劑，例如乙醚等，邊用鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定，邊強(qiáng)力振搖。這樣，將滴定中產(chǎn)生的水楊酸不斷地萃取入有機(jī)溶劑中，同時(shí)降低水楊酸的離解。為使滴定完全，最后將有機(jī)層分出用水洗滌，使可能混溶于有機(jī)層中的鹽洗出，洗液并入水層，再加入有機(jī)溶劑，繼續(xù)以鹽酸標(biāo)準(zhǔn)液滴定至水層顯持續(xù)的橙紅色。 (二)方法：取本品約0.3g，精密稱定，置分液漏斗（125ml)中，加水15ml，乙醚30ml與甲基橙指示液3 滴，用鹽酸滴定液(0.1mol/L)滴定，隨滴隨振搖，至水層顯橙紅色，分取水層，置具塞錐形瓶中，乙醚層用水5ml洗滌，洗液并入錐形瓶中，加乙醚20ml，繼續(xù)用鹽酸滴定液(0.1mol/L)滴定，隨滴隨振搖，至水層顯持續(xù)的橙紅色，即得。（每1ml的鹽酸滴定液(0.1mol/L)相當(dāng)于14.4mg的C7H5O3Na)。 五、注意事項(xiàng) 1.減重法稱量時(shí)，樣品傾出后直接置于分液漏斗內(nèi)。而漏斗口小，樣品不易全部轉(zhuǎn)移，可在漏斗口上置一小漏斗，使樣品不受損失。 2.為了防止先加樣品后加入水的操作步驟會(huì)使樣品積聚在分液漏斗底部，而不易全部溶解，可以先加入少量水后，再稱量樣品。 3.滴定過程中，振搖要充分。 4.分液漏斗放置至水層與醚層分層后，再分取水層，注意將水層全部分出，以免造成損失。 5.本品使用大量乙醚，注意防災(zāi)等安全，實(shí)驗(yàn)完畢后，廢液進(jìn)行回收，切勿倒掉。 6.本次實(shí)驗(yàn)在分液漏斗中進(jìn)行，事先應(yīng)做好檢查，操作小心，以防溶液漏出。 六、計(jì)算 本品為原料藥，其含量測(cè)定計(jì)算公式為： 式中，F為所配制滴定液的濃度校正因數(shù)，T為滴定度，V為供試品消耗滴定液的毫升數(shù)， 為供試品的稱量重量。 七、思考題 1．何謂雙相滴定法？ 2．雙相滴定操作中，有哪些平行原則需要遵循？ 3．雙相滴定法適用于哪些藥物的定量分析？ 4．水楊酸鈉的含量測(cè)定，采用鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液直接滴定時(shí)，有什么缺點(diǎn)？ 實(shí)驗(yàn)五 乙酰水楊酸的兩步滴定法 一、目的要求 1．掌握乙酰水楊酸兩步滴定法測(cè)定含量的依據(jù) 2．掌握兩步滴定法測(cè)定乙酰水楊酸含量的方法 二、儀器和試劑 （一)試劑：乙酰水楊酸、氫氧化鈉、硫酸、酚酞指示劑、乙醇 （二)器材：普通天平、分析天平、錐形瓶、稱量瓶、稱量紙、玻璃棒、酸式滴定管、堿式滴定管。 三、實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備 1．0.1mol/LNaOH滴定液的配制 2．0.05mol/LH2SO4標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制 3．酚酞指示劑的配制 四、基本原理及方法 （一)基本原理 由于乙酰水楊酸在生產(chǎn)過程中，可能有水解，產(chǎn)生水楊酸和醋酸，另外本品劑中還加入枸櫞酸和酒石酸作為穩(wěn)定劑，為避免這些酸性物質(zhì)的干擾采用兩步滴定法。 第一步：用NaOH中和乙酰水楊酸、水楊酸、醋酸、枸櫞酸、酒石酸。 第二步：用過量的NaOH使乙酰水楊酸鹽水解為水楊酸鈉和醋酸鈉，然后用標(biāo)準(zhǔn)硫酸液滴定剩余的NaOH，并將滴定結(jié)果用空白試驗(yàn)校正。
（二)試驗(yàn)方法 取本品10片，精密稱定，研細(xì)，精密稱取適量（約相當(dāng)于阿司匹林0.3g)，置錐形瓶中，加中性乙醇（對(duì)酚酞指示液顯中性)20ml，振搖使阿司匹林溶解，加酚酞指示液3 滴，滴加氫氧化鈉滴定液(0.1mol/L)至溶液顯粉紅色，再精密加氫氧化鈉滴定液(0.1mol/L)40ml，置水浴上加熱15分鐘并時(shí)時(shí)振搖，迅速放冷至室溫，用硫酸滴定液(0.05mol/L) 滴定，并將滴定的結(jié)果用空白試驗(yàn)校正。每1ml 氫氧化鈉滴定液(0.1mol/L)相當(dāng)于18.02mg 的C9H8O4。 五、注意事項(xiàng) 1．分析天平的正確使用 2．減重法稱量的正確操作 3．滴定管的正確操作 4．為了使乙酰水楊酸易于溶解，以及防止在水溶液中滴定時(shí)酯的水解，因而用中性乙醇為溶劑進(jìn)行滴定。 5．第一步中和時(shí)，為了避免樣品的水解，滴定時(shí)應(yīng)注意溫度在20℃以下，并在不斷攪拌下（防止局部過大)較快的滴定。 六、含量計(jì)算公式 ASA的標(biāo)示量%= Vo：空白試驗(yàn)消耗硫酸滴定液體積（ml)；V：樣品測(cè)定試驗(yàn)消耗硫酸滴定液體積(ml)；F：硫酸滴定液濃度校正因數(shù)；T：滴定度；W：供試品片粉取樣量(g)； ：平均片重量（g)。 七、思考題 1．如何配制中性乙醇，為什么要用中性乙醇？ 2．在中和過程中為何要迅速滴定并不斷振搖？ 實(shí)驗(yàn)六 雙波長(zhǎng)等吸收點(diǎn)法測(cè)定速潔舒洗劑中 醋酸氯己啶的含量 一、目的要求 1. 掌握雙波長(zhǎng)分光光度法的基本原理，復(fù)方制劑不經(jīng)分離直接測(cè)定各組分含量的方法。 2. 熟悉單波長(zhǎng)型分光光度計(jì)進(jìn)行雙波長(zhǎng)法測(cè)定。 二、儀器及試藥 替硝唑、醋酸氯己啶、紫外分光光度計(jì) 三、實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備 速潔舒洗液：替硝唑(TN)0.2g，醋酸氯已啶(CA)0.2g蒸餾水加至1000ml,混勻，即得。 四、實(shí)驗(yàn)原理及方法 (一)實(shí)驗(yàn)原理： (1)波長(zhǎng)的選擇：在待測(cè)組分（a)的最大吸收波長(zhǎng)（測(cè)定波長(zhǎng)，l1)處測(cè)定待測(cè)組分和干擾組分（b)吸收度的總和；另選一適當(dāng)波長(zhǎng)（參比波長(zhǎng)，l2)測(cè)定吸收度，并使干擾組分在測(cè)定波長(zhǎng)和參比波長(zhǎng)處的吸收度相等，即 ，而待測(cè)組分在這兩個(gè)波長(zhǎng)處吸收度的差值足夠大。 （2)定量依據(jù) 樣品在二波長(zhǎng)下吸收度差值（DA)：
即，吸收度差值（DA)僅與待測(cè)組分的濃度有關(guān)，而與干擾組分無關(guān)，干擾組分的干擾被消除。 （3)基本條件：① 干擾組分在兩個(gè)波長(zhǎng)處吸收度相等(ΔA=0)，以消除其干擾。 ② 待測(cè)組分在兩個(gè)波長(zhǎng)的ΔA足夠大，以滿足定量分析的要求。 ③ 波長(zhǎng)λ1、λ2應(yīng)選在吸收曲線的平緩處，以減小測(cè)定誤差。 (4)速潔舒洗液的紫外光譜：分別配制10mg·L-1的替硝唑，醋酸氯己啶溶液，以蒸餾水為空白進(jìn)行紫外掃描，結(jié)果顯示，醋酸氯己啶在波長(zhǎng)253nm處有吸收峰，替硝唑在此有等吸收點(diǎn)，故可用雙波長(zhǎng)等吸收點(diǎn)法測(cè)定醋酸氯己啶的含量。 (二) 實(shí)驗(yàn)方法： 1.標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作： 精密稱取醋酸氯己啶對(duì)照品適量(如：0.0192g)溶于100ml量瓶中并稀釋至刻度，分別量取2.0，3.0，3.5，4.5，5.0，5.5ml于50ml量瓶中并稀釋至刻度，分別在波長(zhǎng)253nm、波長(zhǎng)273nm處測(cè)定吸收度，求ΔA，并計(jì)算其回歸方程。 2.樣品的測(cè)定：精密量取本品2ml于50ml量瓶中，用蒸餾水稀釋至刻度，按分光光度法于波長(zhǎng)253nm，273nm處測(cè)吸光度。按回歸方程計(jì)算含量。 五、注意事項(xiàng) 當(dāng)吸光度處在吸收曲線的陡然上升或下降的部位時(shí)，波長(zhǎng)的微小變化可能對(duì)測(cè)定結(jié)果造成顯著影響，故應(yīng)注意測(cè)試條件的一致性。 六、計(jì)算 根據(jù)所求得的回歸方程計(jì)算醋酸氯己啶的含量。 七、思考題 1、雙波長(zhǎng)等吸收點(diǎn)法的基本條件？ 2、雙波長(zhǎng)等吸收點(diǎn)法定量的依據(jù)是什么？ 實(shí)驗(yàn)七 硫酸阿托品注射液的含量測(cè)定(酸性染料比色法)
一、目的要求 掌握酸性染料比色法測(cè)定生物堿制劑的基本原理及操作。 二、試劑與器材 1．試劑：硫酸阿托品、溴甲酚綠、氯仿、蒸餾水。 2．器材：量筒、分析天平、容量瓶(25，50，100ml) 、2ml吸量管、紫外-可見分光光度計(jì)。 三、實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備 1．對(duì)照品溶液的制備：精密稱取在120℃干燥至恒重的硫酸阿托品對(duì)照品25mg，置25 ml容量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密量取5.0ml，置100ml 量瓶中，加水稀釋至刻度，即得（每1ml中含硫酸阿托品約50μg)。 2．供試品溶液的制備：精密量取本品適量（約相當(dāng)于硫酸阿托品2.5mg)，置50ml 量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻即得(每1ml中含硫酸阿托品約50μg)。 3．溴甲酚綠：取溴甲酚綠50mg與鄰苯二甲酸氫鉀1.021mg，加0.2mol/L鹽酸溶液1.6ml使溶解后，加水稀釋成100ml，必要時(shí)過濾。 四、原理與方法 1．原理：在pH3.6 的緩沖液中，硫酸阿托品的陽(yáng)離子（BH＋)與溴甲酚綠的陰離子（In)定量結(jié)合成有色絡(luò)全物（BH＋In－)，用氯仿提取，在波長(zhǎng)420nm處測(cè)定吸收值，并與標(biāo)準(zhǔn)品按同法對(duì)比求得其含量。 2．方法：精密量取對(duì)照品溶液與供試液各2.0ml，分別置于預(yù)先加入10ml氯仿的25ml 分液漏斗中，各加溴甲酚綠溶液2.0ml，振搖提取2分鐘后，靜置使分層(時(shí)間約1小時(shí))，分取澄清氯仿層，移至1cm吸收池，以2ml水按同法操作所得的氯仿液為空白，在420nm的波長(zhǎng)處分別測(cè)定吸收度，計(jì)算并將結(jié)果與1.027相乘(標(biāo)示量為mg/ml，本品應(yīng)為標(biāo)示量的90.0～110.0%)。 五、準(zhǔn)意事項(xiàng) 1．本實(shí)驗(yàn)所用分液漏斗必須干燥無水。 2．本實(shí)驗(yàn)所需標(biāo)準(zhǔn)溶液、試劑及溶劑等均應(yīng)用吸量管精密量取。 3．標(biāo)準(zhǔn)品與供試品均應(yīng)平行操作，振搖與放置時(shí)間應(yīng)一致。 4．分取氯仿層測(cè)定時(shí)，初濾液應(yīng)棄去（約1ml)。所取氯仿層必須澄清透明不得混有水珠。 六、計(jì)算 七、思考題 1．酸性染料比色法的操作要點(diǎn)有哪些？影響測(cè)定的主要因素有哪些？ 2．本法在操作過程中為什么要嚴(yán)防水分混入有機(jī)溶劑中？ 實(shí)驗(yàn)八 鹽酸嗎啉胍的非水堿量法
一、目的要求 1．通過學(xué)習(xí)鹽酸嗎啉胍的非水堿量法，掌握非水溶液滴定法的原理和操作。 2．掌握生物堿鹽酸鹽進(jìn)行非水滴定時(shí)的計(jì)算公式。 二、試劑與器材 1．試劑：鹽酸嗎啉胍，冰醋酸，醋酸汞，結(jié)晶紫，高氯酸。 2．器材：分析天平，酸式滴定管，錐形瓶，量筒，膠頭滴管。 三、實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備 1．高氯酸滴定液的標(biāo)定：取0.75g于105℃ ~110℃電烘箱中干燥至恒重的基準(zhǔn)試劑鄰苯二甲酸氫鉀，置于干燥錐形瓶中，加入50mL乙酸，溫?zé)崛芙猓尤虢Y(jié)晶紫指示劑（5g/L)，用配制好的高氯酸溶液滴定至溶液由紫色變?yōu)樗{(lán)色（微帶紫色)。已知每lml高氯酸滴定液(0.1mol／L)相當(dāng)于20.42mg的鄰苯二甲酸氫鉀，求高氯酸滴定液的濃度。 2．醋酸汞試液：取醋酸汞5g，研細(xì)，加溫?zé)岬谋姿崾谷芙獬?00ml，即得。 3．結(jié)晶紫指示液：取結(jié)晶紫0.5g，加冰醋酸100ml使溶解，即得。 四、原理與方法 本品為嗎啉胍的鹽酸鹽。按干燥品計(jì)算，含C6H13N5O﹒HCl不得少于98.5%。 取本品約0.1g，精密稱定，加冰醋酸20ml，微熱溶解后，放冷，加醋酸汞試液5ml，結(jié)晶紫指示液1滴，用高氯酸液(0.1mol/L)滴定，近終點(diǎn)時(shí)，劇烈振搖至沉淀析出，再滴定至藍(lán)綠色，并將滴定結(jié)果用空白實(shí)驗(yàn)校正，即得，每1ml的高氯酸液(0.1mol/L)相當(dāng)于10.38mg的C6H13N5O.HCl。 五、計(jì)算 公式：?jiǎn)徇覙?biāo)示量(%)= V-滴定嗎啉胍樣品消耗高氯酸的體積(ml)； V0-空白實(shí)驗(yàn)消耗高氯酸的體積(ml)； m-樣品的質(zhì)量(mg)。 六、注意事項(xiàng) 1．本實(shí)驗(yàn)應(yīng)用10ml滴定管進(jìn)行滴定，以消耗高氯酸8ml為宜，故需事先估算出最大稱樣量。 2．所用儀器、藥品不應(yīng)含水，水分的存在影響測(cè)定結(jié)果的準(zhǔn)確度。因此，實(shí)驗(yàn)前應(yīng)將所用儀器洗凈并烘干；實(shí)驗(yàn)方法中，如以較大量的酸酐代替冰醋酸為溶劑時(shí)(易氧化的樣品除外)可以提高終點(diǎn)的靈敏度。 3．滴定時(shí)，滴定速度不要太快，太快時(shí)，粘附在滴定管內(nèi)壁上的溶液還未完全流下，終點(diǎn)的讀數(shù)易產(chǎn)生誤差。 4．高氯酸標(biāo)準(zhǔn)溶液應(yīng)注意其穩(wěn)定性。 由于所用的溶劑為冰醋酸，具有揮發(fā)性，而且膨脹系數(shù)也較大，所以溫度和貯存條件都可影響標(biāo)準(zhǔn)液的濃度。若滴定樣品與標(biāo)定標(biāo)準(zhǔn)液時(shí)的溫度有差別，則需重新標(biāo)定或按下式將標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度加以校正。 如果上述兩種溫度(t0與t1)相差太大(超過10℃)或貯存時(shí)間太久超過30天，則必須在臨用前重新標(biāo)定。 七、思考題 1．加入醋酸汞的目的是什么？ 2．非水堿量法的基本原理是什么？ 3．非水滴定法的操作要點(diǎn)有哪些？ 4．請(qǐng)闡明本實(shí)驗(yàn)中滴定度的由來。 實(shí)驗(yàn)九 鹽酸嗎啉胍片的紫外分光光度法 一、目的要求 1．掌握紫外分光光度法測(cè)定鹽酸嗎啉胍的方法和含量計(jì)算方法 2．學(xué)習(xí)紫外分光光度法的一般操作步驟。 3．掌握紫外分光光度法中工作方程的制備方法。 二、試劑與器材 1．試劑：鹽酸嗎啉胍標(biāo)準(zhǔn)品，鹽酸嗎啉胍片劑。 2．器材：紫外分光光度計(jì)，電子天平，容量瓶，吸量管。 三、原理與方法 1．工作方程的繪制 取鹽酸嗎啉胍標(biāo)準(zhǔn)品約0.1g，精密稱定，置500ml容量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度。精密量取1、2、3、4、5、6、7、8ml分置8個(gè)100ml容量瓶中，用水稀釋至刻度。以水為空白，在273nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度，以吸光度對(duì)濃度進(jìn)行一元回歸得工作方程。 2．樣品的測(cè)定 取本品10片，精密稱定，研細(xì)，取本品細(xì)粉適量(約相當(dāng)于鹽酸嗎啉胍50mg)精密稱定，置100ml容量瓶中，加水使溶解并稀釋至刻度。濾過，棄初濾液(約20ml)，取續(xù)濾液1ml置100ml容量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻。以水為空白，在273nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度，代入工作方程計(jì)算含量。 四、計(jì)算 測(cè)定出樣品吸光度值后，將其代入工作方程并計(jì)算出濃度C，然后按下式計(jì)算嗎啉胍標(biāo)示量％ C：為計(jì)算出的濃度(g/ml) D：稀釋倍數(shù) W樣：為稱取樣品量（g) V：為將W樣(g)樣品溶解成的準(zhǔn)確體積（ml) S標(biāo)：為標(biāo)示量（g/片) n：為所取片個(gè)數(shù) Wn：為n個(gè)片的總重量 五、思考題 片粉溶解后應(yīng)過濾，實(shí)驗(yàn)操作過程中可否省略此步驟？為什么？ 實(shí)驗(yàn)十 氨基比林的pH指示劑吸光度比值法
一、目的要求 1. 掌握pH指示劑吸光度比值法測(cè)定藥物含量的基本原理。 2. 熟悉測(cè)定氨基比林的基本操作方法。 二、試劑與器材 1．試劑：氨基比林，鹽酸標(biāo)準(zhǔn)液，溴酚蘭，無水乙醇。 2．器材：紫外分光光度計(jì)，電子天平，燒杯，容量瓶， 三、實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備 溴酚蘭試液：取0.05g溴酚蘭, 溶于乙醇, 用乙醇稀釋至100ml。 四、原理與方法 原理：pH指示劑吸光度比值法是中和法與分光光度法相結(jié)合的一種差示定量法，本法不需測(cè)得滴定終點(diǎn)時(shí)標(biāo)準(zhǔn)溶液的體積，而是一次加入定量標(biāo)準(zhǔn)溶液和指示劑，在pH指示劑堿式色和酸式色最大吸收λ1和λ2處(λ1<λ2)測(cè)定吸光度，以簡(jiǎn)單的數(shù)字處理計(jì)算含量的一種快速分析方法。 在等當(dāng)點(diǎn)附近，可在指示劑(溴酚蘭)堿式色和酸式色最大吸收波長(zhǎng)λ1，λ2處(λ1<λ2)測(cè)定吸光度A1、A2。求得吸光度比值r=A1/(A1+A2)；隨著溶液pH值的變化，溴酚蘭在同一波長(zhǎng)處的吸光度有很大變化，因此r也有很大變化。從溴酚蘭指示劑r～pH關(guān)系曲線可見，在某一pH區(qū)域內(nèi)r隨著pH值的變化而發(fā)生急劇變化，曲線斜率最大，幾乎成直線關(guān)系。因此，在等當(dāng)點(diǎn)附近pH很小的變化即可引起r值較大變化。 氨基比林為吡唑酮類藥物，其吡唑酮環(huán)上的C4上的二甲氨基具弱堿性，在水溶液中雖可用標(biāo)準(zhǔn)酸液直接滴定，但突躍不明顯，等當(dāng)點(diǎn)時(shí)pH為2.7。利用pH指示劑吸光度比值法，可進(jìn)行測(cè)定。測(cè)定選用溴酚蘭為指示劑，其酸式色與堿式色吸收光譜有顯著差異，前者最大吸收波長(zhǎng)在437nm，后者最大吸收波長(zhǎng)在519nm，在等當(dāng)點(diǎn)附近即使X(V等/V)很小的變化，也能引起r[即A2/(A1+A2)]顯著變化。因此可利用r～X之間的關(guān)系，可預(yù)先繪制一系列r～X工作曲線。當(dāng)進(jìn)行樣品測(cè)定時(shí)，只需測(cè)出該樣品在一定條件下的r值，再由r～X關(guān)系表中查出對(duì)應(yīng)的X值即可按下式計(jì)算出樣品的百分含量。 方法：取本品(干燥品)1.1475g·f～1.1710g·f (f為標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度系數(shù))于小燒杯中精密稱定，準(zhǔn)確加入0.5mol/L鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液10ml，溶解后轉(zhuǎn)移至50ml容量瓶中，加入溴酚蘭試液(0.05%無水乙醇溶液)1ml，加水稀釋至刻度，混勻，以此液作為供試液，用水作空白液，在437nm測(cè)得吸光度為A1，在591nm測(cè)得吸光度為A2，根據(jù)r= A1/(A1+A2)求出吸光度比值r。再?gòu)膔～X曲線中求X值。 T為滴定度：1ml鹽酸液(0.5mol/L)相當(dāng)于0.1156g氨基比林。 附：r～X關(guān)系表 五、注意事項(xiàng) 1． 六、計(jì)算 七、思考題 1． 實(shí)驗(yàn)十一 HPLC法測(cè)定雙黃連口服液的含量 一、目的要求 1．掌握高效液相色譜法測(cè)定中藥制劑有效成分的原理。 2．了解高效液相色譜法在藥物分析中應(yīng)用的一般方法。 二、試劑與器材 1．試劑：雙黃連口服液，黃芩苷對(duì)照品，綠原酸對(duì)照品，連翹苷對(duì)照品，十八烷基硅烷鍵合硅膠，甲醇，冰醋酸。 2．器材：液相色譜儀，容量瓶。 三、原理與方法 黃芩 照高效液相色譜法測(cè)定。 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)：用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；甲醇-水-冰醋酸（50:50:1)為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為274nm。理論板數(shù)按黃芩苷峰計(jì)算應(yīng)不低于1500。 對(duì)照品溶液的制備：精密稱取黃芩苷對(duì)照品10mg，置100ml容量瓶中，加50%甲醇適量，置水浴中振搖使溶解，放置至室溫，稀釋至刻度，搖勻，即得（每1ml中含黃芩苷0.1mg)。 供試品溶液的制備：精密量取裝量項(xiàng)下的本品1ml，置50ml量瓶中，加50%甲醇適量，超聲處理20分鐘，放置至室溫，加50%甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得。 測(cè)定法：分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各5μl，注入液相色譜儀，測(cè)定，即得。 本品每支含黃芩按黃芩苷(C21H18O11)計(jì)，不得少于80mg。 金銀花 照高效液相色譜法測(cè)定。 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)：用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；甲醇-水-冰醋酸（20:80:1)為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為324nm。理論板數(shù)按綠原酸峰計(jì)算應(yīng)不低于6000。 對(duì)照品溶液的制備：取綠原酸對(duì)照品適量，精密稱定，置棕色容量瓶中，加水制成每1ml中含40mg的溶液，即得。 供試品溶液的制備：精密量取本品2ml，置50ml棕色量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，即得。 測(cè)定法：分別精密吸取對(duì)照品溶液10μl與供試品溶液10-20μl，注入液相色譜儀，測(cè)定即得。 本品每1ml含金銀花以綠原酸(C16H18O9)計(jì)，不得少于0.60mg。 連翹：照高效液相色譜法測(cè)定。 色譜條件與系統(tǒng)適用性實(shí)驗(yàn) 以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以乙腈-水（25：75)為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為278nm，理論板數(shù)按連翹苷峰計(jì)算不低于6000。 對(duì)照品溶液的制備 取連翹苷對(duì)照品適量，精密稱定，加50甲醇制品每1ml含60μg的溶液，即得。 供試品溶液的制備 精密量取本品1μl，置中性氧化鋁柱（100-200目，6g，內(nèi)徑1cm)上，用70％乙醇40ml洗脫，收集洗脫液，濃縮至干，殘?jiān)?0％甲醇適量，溫?zé)崾谷芙�，轉(zhuǎn)移至5ml量瓶中，并稀釋至刻度，搖勻，即得。 測(cè)定法 分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測(cè)定，即得。 本品每1ml含連翹以連翹苷(C29H36O25)計(jì)，不得少于0.30mg。 四、計(jì)算 每支含黃芩苷(C21H18O11) = ms-黃芩苷標(biāo)準(zhǔn)品的質(zhì)量； Ai-樣品中黃芩苷的峰面積； As-黃芩苷標(biāo)準(zhǔn)品的峰面積； V-雙黃連的裝量。 每1ml含綠原酸(C16H18O9)= Cs-綠原酸標(biāo)準(zhǔn)品的濃度； Ai-樣品中綠原酸的峰面積； As-綠原酸標(biāo)準(zhǔn)品的峰面積； Vs-綠原酸標(biāo)準(zhǔn)品的進(jìn)樣量； Vi-供試品的進(jìn)樣量。 每1ml含連翹以連翹苷(C29H36O25)：計(jì)算(略) 五、注意事項(xiàng) 1． 六、思考題 實(shí)驗(yàn)十二 葡萄糖注射液的旋光分析法
[C6H12O6·H2O＝198.17] 一、目的要求 1．掌握旋光法測(cè)定葡萄糖含量的基本原理和方法。 2．學(xué)會(huì)正確使用旋光儀。 二、基本原理 本品是葡萄糖的滅菌水溶液。葡萄糖的分子結(jié)構(gòu)中五個(gè)碳（C*)都是手性碳原子，具有旋光性。當(dāng)直線偏振光通過該具有光學(xué)活性的化合物溶液時(shí)，能引起旋光現(xiàn)象，使偏振光的平面向左或向右旋轉(zhuǎn)。此種旋轉(zhuǎn)在一定條件下，有一定的度數(shù)，稱為旋光度。旋光度（α)與溶液的濃度（c)和偏振光透過溶液的厚度（l)成正比。當(dāng)偏振光透過厚1dm并每1ml中含有旋光性物質(zhì)1g的溶液時(shí)，在一定波長(zhǎng)與溫度下測(cè)定的旋光度稱為比旋度[α]tD，即[α]tD＝α／lc。式中，D為鈉光譜的D線（589.3nm)，t為測(cè)定時(shí)的溫度。葡萄糖的比旋度[α]tD＝＋52.75度。所以測(cè)定待測(cè)葡萄糖液旋光度即可求得其含量。 三、實(shí)驗(yàn)方法 精密稱取本品適量（約與葡萄糖10g相當(dāng))，置100ml 量瓶中，加氨試液0.2ml[10%或10%（g/ml)以下規(guī)格的本品可直接取樣測(cè)定]，用水稀釋至刻度，搖勻，靜置10分鐘，得供試液。取出旋光計(jì)的測(cè)定管，用供試液沖洗數(shù)次，緩緩注入供試液適量（注意勿使發(fā)生氣泡)，加蓋密封后，置于旋光計(jì)內(nèi)，緩緩旋轉(zhuǎn)檢偏鏡檢視，至視野中均勻明亮，讀取刻度盤上表示的度數(shù)，即得供試液的旋光度，使偏光向右旋轉(zhuǎn)者（順時(shí)針方向)為左旋，以“－”符號(hào)表示，用同法讀取旋光度三次，取其平均數(shù)按同法測(cè)定蒸餾水的讀數(shù)為空白，測(cè)得的旋光度（α)與1.0426相乘，即得100ml供試液中含有的C6H12O6·H2O的重量(g)。 藥典規(guī)定含葡萄糖(C6H12O6·H2O)應(yīng)為標(biāo)示量的95.0~105.0%。 四、操作要點(diǎn)及注意事項(xiàng) 1．配制供試液后，要靜置10分鐘，以達(dá)到平衡后才能測(cè)定。10％和5％的葡萄糖注射液無需稀釋，可以直接取樣測(cè)定。 2．供試液測(cè)定時(shí)的溫度必須調(diào)節(jié)至25℃，否則影響比旋度，致使測(cè)定結(jié)果不準(zhǔn)確。 3．測(cè)定管兩端的圓玻片，為光學(xué)玻璃片，測(cè)定前應(yīng)小以用軟紙擦拭，以防磨損。 4．測(cè)定管洗凈后，應(yīng)用供試液體蕩洗數(shù)次，以確保濃度的一致。 5．供試液體應(yīng)緩緩加入，不能有氣泡，否則應(yīng)重新加入。加了液體后，兩頭密封時(shí)勿忘加墊橡皮圈，以免泄漏。 6．測(cè)定時(shí)先調(diào)整焦距，俟視野最清楚時(shí)，緩慢旋轉(zhuǎn)檢偏鏡，前后多試幾次，直至視中均勻明亮。以同法讀取三次讀數(shù)取其平均值。 7．測(cè)定完畢，測(cè)定管必須立即洗滌，以避免兩頭襯墊的橡皮圈因接觸溶劑而發(fā)粘。用綢布或擦鏡紙拭凈鏡面的灰塵、油污，以保持清潔，避免沾污，最后用布套將光學(xué)系統(tǒng)罩上。 8．鈉光燈有一定使用壽命，連續(xù)使用時(shí)間不宜超過2 小時(shí)。 二、數(shù)據(jù)處理 據(jù) 式中[α]25D為c=1g/ml、l=1dm時(shí)的旋光度（α) 所以 100ml供試液中無水葡萄糖的克數(shù)為 即100ml供試液中含水葡萄糖的克數(shù)為
五、實(shí)驗(yàn)后思考 該旋光法能否適用于葡萄糖氯化鈉注射液中葡萄糖的分析？為什么？ 實(shí)驗(yàn)十三 差示分光光度法測(cè)定苯巴比妥片的含量 （設(shè)計(jì)性實(shí)驗(yàn)) 一、實(shí)驗(yàn)的目的與要求： 掌握差示分光光度法消除干擾的原理和含量測(cè)定的方法 熟悉差示分光光度法測(cè)定波長(zhǎng)選擇的幾種方法 二、實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)性要點(diǎn)： 1．根據(jù)巴比妥類藥物的紫外吸收光譜，設(shè)定對(duì)照溶液和待測(cè)溶液的濃度。 2．在3種不同pH值的溶液中苯巴比妥的濃度必須相等。 3．根據(jù)原光譜圖有4種組合可供選擇，比較各種組合下的差示光譜圖。選擇其中一種較好的組合進(jìn)行苯巴比妥片的含量測(cè)定。 4．根據(jù)選定的差示光譜圖，選擇測(cè)定波長(zhǎng)。 5．對(duì)照法測(cè)定含量。 三、主要實(shí)驗(yàn)儀器設(shè)備： 紫外分光光度計(jì)（掃描型、3臺(tái)) 托盤天平（感量0.1g、10架)，分析天平（萬(wàn)分之一、5臺(tái)) 四、相關(guān)主要實(shí)驗(yàn)材料和備品： 1．滴定臺(tái)（30個(gè))，萬(wàn)能夾（60個(gè))，容量瓶（50ml、250個(gè))，移液管（1ml、2ml、5ml、10ml各60支)，燒杯（50 ml、100 ml各60個(gè))，研缽（30個(gè))，玻璃棒（60根)，三角漏斗（60個(gè))，定量濾紙（Φ10 cm、200張)。 2．苯巴比妥對(duì)照品（100g)，苯巴比妥片（規(guī)格15mg或30mg或100mg、1000片) 3． 氫氧化鈉（500g)，氯化銨（500g)。（均為分析純) 4．甲醇（14, 000 ml)，濃硫酸（1, 000 ml)，氨水（500 ml)（均為分析純) 5．蒸餾水（20 L) 五、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容與步驟： 1 溶液配制 1.1 對(duì)照液配制 精密稱取苯巴比妥對(duì)照品適量，加甲醇溶解并稀釋成適當(dāng)濃度，作為貯備液。精密吸取一定體積的貯備液3份，分別用0.05 mol/L H2SO4溶液、銨－氯化銨緩沖液（pH 10)，0.1 mol/L NaOH溶液稀釋至50 ml，作為對(duì)照液1、2、3。 1.2 測(cè)定液配制 取苯巴比妥片20片，精密稱定，研細(xì)，精密稱取適量，加甲醇溶解并稀釋至50 ml，過濾，棄去初濾液，精密吸取一定體積的續(xù)濾液3份，分別用0.05 mol/L H2SO4溶液、銨－氯化銨緩沖液（pH 10)，0.1 mol/L NaOH溶液稀釋至50 ml，作為測(cè)定液1、2、3。 2 光譜測(cè)定 2.1 原光譜掃描 取對(duì)照液1、2、3，分別以各自的溶液為空白，于200 nm－400 nm 掃描，測(cè)定吸收光譜。 2.2 差示光譜掃描 根據(jù)原光譜圖形（參見教材)，選擇其中兩種溶液，掃描它們的差示光譜，根據(jù)差示光譜圖確定測(cè)定波長(zhǎng)。 2.3 樣品測(cè)定 分別以相應(yīng)的溶液為空白，在選定的波長(zhǎng)下測(cè)定選定的兩種對(duì)照液的吸光度，并計(jì)算吸光度差值，記為△A對(duì)。另取兩種與對(duì)照液相同pH值的樣品測(cè)定液，同法測(cè)定計(jì)算吸光度差值，記為△A樣。用標(biāo)準(zhǔn)品對(duì)照法計(jì)算樣品溶液的濃度，并計(jì)算苯巴比妥片相當(dāng)于標(biāo)示量的百分含量。 www.med126.com; 實(shí)驗(yàn)十四 氫溴酸東莨菪堿及其片劑的質(zhì)量分析(綜合性實(shí)驗(yàn)) 一、實(shí)驗(yàn)的目的與要求： 1.了解生物堿的鑒別、檢查的方法與原理 2.掌握氫溴酸東莨菪堿片劑的質(zhì)量分析的方法與原理 二、實(shí)驗(yàn)綜合性要點(diǎn)： 多個(gè)環(huán)節(jié)、多種手段、多種方法和技術(shù)實(shí)施藥品質(zhì)量的全面控制。 從藥物的外觀性狀、藥品的理化常數(shù)、藥品的真?zhèn)舞b別、藥物的一般雜質(zhì)和特殊雜質(zhì)檢查、藥物的含量測(cè)定對(duì)藥物的質(zhì)量進(jìn)行分析。 對(duì)小劑量片劑進(jìn)行含量均勻度檢查，確保用藥的安全和有效。 應(yīng)用旋光儀、酸度計(jì)、紅外光譜儀、紙色譜法各種儀器方法。 三、主要實(shí)驗(yàn)儀器設(shè)備： 1.定量毛細(xì)管（100支)，溫度計(jì)（分浸型250℃、30支)，電熱套（30套) 2.紙色譜法展開室、點(diǎn)樣器（30套)、 3.水浴鍋（10個(gè))、濾紙（10張) 4. 旋光儀及相應(yīng)附件（自動(dòng)、3臺(tái)) 5. 酸度計(jì)（雷磁pH-3C型、3臺(tái))，復(fù)合電極（3支) 6. 紅外光譜儀（中紅外、2臺(tái)) 7. 干燥箱（電熱溫度可調(diào)型、3臺(tái)) 8. 紫外分光光度計(jì)（掃描型、3臺(tái)) 9. 托盤天平（感量0.1g、10個(gè))，分析天平（萬(wàn)分之一、5臺(tái)) 10. 高速離心機(jī)（3臺(tái)) 四、相關(guān)主要實(shí)驗(yàn)材料和備品： 1．分液漏斗（60ml、90個(gè))，滴定管（酸式、10ml、30個(gè))，試管（硬質(zhì)玻璃、10ml、150個(gè))，移液管（1ml、2ml、5ml、10ml各60支)燒杯（50 ml、100 ml各60個(gè))，離心管（具塞、5ml、30支)，研缽（30個(gè)) 2．氫溴酸東莨菪堿(對(duì)照品500mg)，氫溴酸東莨菪堿（原料藥500g)、氫溴酸東莨菪堿片(規(guī)格0.3g/片、2000片) 3．蒸餾水（20L)、氯仿（2000ml)，乙醇（1000ml)，硝酸(1000ml),氨水(500ml), 乙醚硅油或液狀石蠟(5000ml) , 高氯酸(1000ml), 冰醋酸(5000ml), 正丁醇(5000ml)，乙醚（500 ml)，鹽酸（500ml)。 4．高錳酸鉀（500g)，醋酸汞（500g),結(jié)晶紫(50g)，碘化鉍鉀（100g)無水磷酸氫二鈉(500g)，無水磷酸二氫鉀（500g),溴甲酚綠(100g), 鄰苯二甲酸氫鉀(500g), 二氯化汞(100g)， 氫氧化鉀（500g),硝酸銀(100g)。注：以上化學(xué)試劑均為分析純 五、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容與步驟：（詳見中國(guó)藥典(二部)2005年版) 1 氫溴酸東莨菪堿原料的分析 1.1 性狀 1.1.1 熔點(diǎn)測(cè)定 1.1.2 比旋度測(cè)定 1.2 鑒別試驗(yàn) 1.2.1 沉淀反應(yīng) 1.2.2 紅外光譜對(duì)照 1.2.3 溴化物反應(yīng) 1.3 檢查 1.3.1 溶液的澄清度檢查 1.3.2 酸度檢查 1.3.3 其他生物堿的檢查 1.3.4 易氧化物的檢查 1.3.5 干燥失重的檢查 1.4 含量測(cè)定（非水滴定法) 2 氫溴酸東莨菪堿片的分析 2.1 性狀 2.2 鑒別（紙色譜法、托烷生物堿的鑒別反應(yīng)、溴化物鑒別反應(yīng)) 2.3 含量均勻度檢查 2.4 含量測(cè)定（分光光度法) | 
