使用純化的抗原特異性抗體檢測軍團(tuán)菌屬細(xì)菌的方法
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公開(公告)號
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CN1136008C
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公開(公告)日
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2004.01.28
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申請(專利)號
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CN99810035.8
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申請日期
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1999.08.25
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專利名稱
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使用純化的抗原特異性抗體檢測軍團(tuán)菌屬細(xì)菌的方法
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主分類號
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A61K39/40
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分類號
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A61K39/40;A61K35/74
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分案原申請?zhí)? |
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優(yōu)先權(quán)
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1998.8.25 US 09/139,720
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申請(專利權(quán))人
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比南股份有限公司
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發(fā)明(設(shè)計(jì))人
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V·A·庫奇納;E·V·莫洛科夫
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地址
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美國緬因州
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頒證日
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2004.01.28
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國際申請
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PCT/US99/19506 1999.8.25
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進(jìn)入國家日期
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2001.02.26
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專利代理機(jī)構(gòu)
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上海專利商標(biāo)事務(wù)所
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代理人
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徐迅
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國省代碼
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美國;US
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主權(quán)項(xiàng)
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一種檢測液體中軍團(tuán)菌屬至少一種細(xì)菌或血清型的細(xì)菌、或其糖抗原成分存在的方法，其特征在于，該方法包括以下步驟：(a)將已鑒定的軍團(tuán)菌屬菌種或菌種血清型的細(xì)菌培養(yǎng)至合適大小，收集濕細(xì)胞沉淀形式的該菌種或菌種血清型的細(xì)胞；(b)用一系列步驟從所述濕細(xì)胞沉淀中獲得基本無蛋白質(zhì)的糖抗原，這些步驟包括(i)將所述濕細(xì)胞沉淀懸浮在堿性溶液中并混合；(ii)用強(qiáng)酸將pH調(diào)節(jié)到酸性pH；(iii)將步驟(ii)的混合物分成兩層；(iv)收集上層，將其pH調(diào)節(jié)到約中性；(v)在步驟(iv)的產(chǎn)物中加入廣譜蛋白酶，消化破壞剩余蛋白質(zhì)；(vi)將步驟(v)的產(chǎn)物pH用弱堿水溶液調(diào)節(jié)到堿性一側(cè)和；(vii)分離出基本無蛋白的糖抗原；(c)通過間隔分子將步驟(b)中得到的基本無蛋白質(zhì)的糖抗原與層析親和柱交聯(lián)；(d)將針對如步驟(a)中培養(yǎng)的同一軍團(tuán)菌屬菌種或菌種血清型的抗體通過步驟(c)的親和層析柱，產(chǎn)生純化的抗原特異性抗體；和(e)對懷疑含有如步驟(a)中培養(yǎng)的同一軍團(tuán)菌屬菌種或菌種血清型的液體樣品進(jìn)行試驗(yàn)，該試驗(yàn)包括步驟：通過使液體樣品接觸主要含有步驟(d)的純化抗原特異性抗體的檢測劑，檢測所述軍團(tuán)菌屬菌種或菌種血清型的糖抗原。
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摘要
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從軍團(tuán)菌屬菌種或菌種血清型細(xì)菌分離得到基本無蛋白的O-糖或O-多糖抗原，并與活化層析柱偶聯(lián)。用如此制備的層析柱純化針對軍團(tuán)菌屬的同一菌種或菌種血清型的未加工抗體。用得到的抗原特異性抗體在免疫化學(xué)試驗(yàn)中檢測人中軍團(tuán)病、龐蒂亞克熱和其它軍團(tuán)菌導(dǎo)致的疾病，并用于檢測環(huán)境樣品中的軍團(tuán)菌屬細(xì)菌。本發(fā)明詳細(xì)描述了一種在免疫層析試驗(yàn)裝置中進(jìn)行的快速、高特異性和靈敏的侵肺軍團(tuán)菌血清1型的免疫試驗(yàn)。
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國際公布
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WO00/10584 英 2000.3.2
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