| 公開(公告)號 | CN1155713C |
| 公開(公告)日 | 2004.06.30 |
| 申請(專利)號 | CN96194540.0 |
| 申請日期 | 1996.04.05 |
| 專利名稱 | 選擇轉(zhuǎn)基因植物細胞的方法 |
| 主分類號 | C12N15/82 |
| 分類號 | C12N15/82;C12N15/64 |
| 分案原申請?zhí)? | |
| 優(yōu)先權(quán) | 1995.4.6 US 08/417,618 |
| 申請(專利權(quán))人 | 塞迷尼思蔬菜種子公司 |
| 發(fā)明(設計)人 | 安娜·朱莉婭·特魯爾森 |
| 地址 | 美國加利福尼亞州 |
| 頒證日 | 2004.06.30 |
| 國際申請 | PCT/US1996/004688 1996.4.5 |
| 進入國家日期 | 1997.12.05 |
| 專利代理機構(gòu) | 中原信達知識產(chǎn)權(quán)代理有限責任公司 |
| 代理人 | 丁業(yè)平 |
| 國省代碼 | 美國;US |
| 主權(quán)項 | 用于選擇性增加在異養(yǎng)培養(yǎng)條件下培養(yǎng)的轉(zhuǎn)化的和非轉(zhuǎn)化的植物細胞混合物中再生的轉(zhuǎn)化植物數(shù)量的方法，所說方法包括下列步驟：(a)在一種培養(yǎng)基中在異養(yǎng)培養(yǎng)條件下培養(yǎng)轉(zhuǎn)化的和非轉(zhuǎn)化的植物細胞的混合物，除了碳源外，所述培養(yǎng)基含有非轉(zhuǎn)化植物細胞增殖和生長需要的基本營養(yǎng)和58.1mg/L至174.3mg/L的磷，所述碳源被一種加密碳源替代，該加密碳源不支持所說的非轉(zhuǎn)化細胞的生長和增殖，所說的轉(zhuǎn)化細胞含有最少含有一個表達盒的異源基因組DNA片段，所說的表達盒含有異源DNA可選擇標記片段，該片段包括(i)編碼異源酶的異源基因，所述異源酶的表達將加密碳源轉(zhuǎn)化為在異養(yǎng)培養(yǎng)條件下支持所說轉(zhuǎn)化植物細胞生長和增殖的碳源，該第一基因可操作地與(ii)控制該異源基因表達的啟動子DNA片段和(iii)終止子DNA片段連接；(b)使異養(yǎng)培養(yǎng)條件保持足以使所述的轉(zhuǎn)化植物細胞表達所述的異源酶、生長和增殖的一段時間；和(c)回收所說的轉(zhuǎn)基因增殖細胞。 |
| 摘要 | 本發(fā)明涉及用于增加在異養(yǎng)培養(yǎng)條件下培養(yǎng)的轉(zhuǎn)化的和非轉(zhuǎn)化的植物細胞混合物中的轉(zhuǎn)化植物細胞的數(shù)量的選擇方法。根據(jù)該方法，在一種培養(yǎng)基中，在異養(yǎng)培養(yǎng)條件下培養(yǎng)轉(zhuǎn)化的和非轉(zhuǎn)化的植物細胞混合物，所述培養(yǎng)基含有非轉(zhuǎn)化植物細胞增殖和生長所需的基本營養(yǎng)和約1.5－3倍標準量的磷，其中不含支持所述生長和增殖的碳源。由加密碳源替代所利用的碳源，所述加密碳源不支持所述的非轉(zhuǎn)化植物細胞的生長和增殖。轉(zhuǎn)化的植物細胞有插入到至少含有一個表達盒的其基因組中的異源DNA片段。該表達盒含有一個異源DNA選擇性標記片段，該片段包括編碼異源酶的第一異源基因，該基因的表達將加密碳源轉(zhuǎn)化為在異養(yǎng)培養(yǎng)條件下支持轉(zhuǎn)化植物細胞生長和增殖的碳源。另外，本發(fā)明還涉及提高在延遲的選擇性培養(yǎng)條件下培養(yǎng)的轉(zhuǎn)化的和非轉(zhuǎn)化的植物細胞混合物中轉(zhuǎn)化植物細胞的數(shù)量的選擇方法。 |
| 國際公布 | WO1996/031512 英 1996.10.10 |
