人呼吸道合胞病毒熒光定量PCR試劑盒及其檢測(cè)方法
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公開(公告)號(hào)
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CN1544656A
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公開(公告)日
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2004.11.10
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申請(qǐng)(專利)號(hào)
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CN200310111382.7
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申請(qǐng)日期
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2003.11.14
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專利名稱
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人呼吸道合胞病毒熒光定量PCR試劑盒及其檢測(cè)方法
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主分類號(hào)
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C12Q1/68
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分類號(hào)
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C12Q1/68;G01N33/52
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分案原申請(qǐng)?zhí)? |
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優(yōu)先權(quán)
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申請(qǐng)(專利權(quán))人
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武漢大學(xué);武漢市兒童醫(yī)院
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發(fā)明(設(shè)計(jì))人
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張楚瑜;張其威;游上游
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地址
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430072湖北省武漢市武昌珞珈山
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頒證日
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國(guó)際申請(qǐng)
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進(jìn)入國(guó)家日期
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專利代理機(jī)構(gòu)
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武漢宇晨專利事務(wù)所
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代理人
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王敏鋒
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國(guó)省代碼
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湖北;42
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主權(quán)項(xiàng)
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一種人呼吸道合胞病毒熒光定量PCR試劑盒，其特征是該試劑盒包括：(a)RNA提取液，使用Trizol一步法；(b)逆轉(zhuǎn)錄酶M-MLV，使用濃度為10-1000U每個(gè)反應(yīng)體系；(c)RNA酶抑制劑，使用濃度為10-100U每個(gè)反應(yīng)體系；(d)逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)液，使用的引物P1為：5’TTAGCAAAGTCAAGTTGAATGAT3’，使用濃度為0.1-10umol/L，還包括有RT5×buffer溶液，dNTPs溶液，使用的濃度為0.1-10mmol/L和無菌雙蒸水；(e)標(biāo)準(zhǔn)陽(yáng)性模板，含有人呼吸道合胞病毒核衣殼N蛋白基因3’端195個(gè)堿基片段SEQIDNO.1與PGEM-TEasy載體構(gòu)成的PGEMT195重組質(zhì)粒；(f)HotstartTaqDNA聚合酶，使用濃度為1-10U每個(gè)反應(yīng)體系；(g)熒光定量PCR反應(yīng)液；(h)標(biāo)準(zhǔn)陰性參控液，即無模板熒光定量反應(yīng)液，由(f)和(g)組成。
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摘要
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本發(fā)明公開了一種人呼吸道合胞病毒(Human Respiratory Syncytial Virus，HRSV)熒光定量PCR試劑盒及其檢測(cè)方法，該試劑盒包括RNA提取液、逆轉(zhuǎn)錄酶、RNA酶抑制劑、逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)液、標(biāo)準(zhǔn)陽(yáng)性模板、Taq DNA聚合酶、熒光定量反應(yīng)液和標(biāo)準(zhǔn)陰性參控液。利用該試劑盒，首先提取待測(cè)樣品中病毒總RNA，逆轉(zhuǎn)錄成cDNA，然后與標(biāo)準(zhǔn)陽(yáng)性模板一起作熒光定量PCR，根據(jù)熒光定量PCR儀器所帶的軟件計(jì)算出待測(cè)樣品中呼吸道合胞病毒的起始濃度。本發(fā)明檢測(cè)速度快，操作方便安全，省時(shí)效率高，可有效的對(duì)嬰幼兒及成人病毒性呼吸道感染患者進(jìn)行病毒RNA的檢測(cè)，從而達(dá)到了早期診斷和有效預(yù)防呼吸道合胞病毒感染。
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國(guó)際公布
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評(píng)論加載中...
