| 公開(公告)號(hào) | CN1236055C |
| 公開(公告)日 | 2006.01.11 |
| 申請(專利)號(hào) | CN03130264.5 |
| 申請日期 | 2003.06.27 |
| 專利名稱 | 高轉(zhuǎn)移傾向的人乳腺癌細(xì)胞系及其建立方法 |
| 主分類號(hào) | C12N5/00(2006.01)I |
| 分類號(hào) | C12N5/00(2006.01)I |
| 分案原申請?zhí)? | |
| 優(yōu)先權(quán) | |
| 申請(專利權(quán))人 | 南開大學(xué) |
| 發(fā)明(設(shè)計(jì))人 | 葉麗虹;張曉東;朱惠芳;吳蓮英;鞠永健 |
| 地址 | 300071天津市衛(wèi)津路94號(hào) |
| 頒證日 | |
| 國際申請 | |
| 進(jìn)入國家日期 | |
| 專利代理機(jī)構(gòu) | 天津市學(xué)苑有限責(zé)任專利代理事務(wù)所 |
| 代理人 | 解松凡 |
| 國省代碼 | 天津;12 |
| 主權(quán)項(xiàng) | 一種高轉(zhuǎn)移傾向人乳腺癌細(xì)胞系LM-MCF-7，其特征是用下述方法建立的：1)接種SCID鼠：取乳腺癌親本MCF-7細(xì)胞懸液皮下接種于SCID小鼠肩部，所述細(xì)胞懸液的濃度為5×107/0.2ml；2)確認(rèn)轉(zhuǎn)移部位：將SCID鼠處死，對各個(gè)組織的病理切片進(jìn)行顯微鏡下觀察，確立其轉(zhuǎn)移灶的部位為肺臟、脾臟、骨髓和淋巴結(jié)；3)高轉(zhuǎn)移傾向的人乳腺癌細(xì)胞系的獲得：接種MCF-7細(xì)胞68天后，將SCID鼠處死，取出肺臟，進(jìn)行原代培養(yǎng)，采用下列步驟：用加有雙抗的Hank’s液漂洗組織塊5分鐘；使用剪刀剪碎組織，去除血液、脂肪、神經(jīng)組織、結(jié)締組織和壞死組織；將肺組織剪切成1mm3左右小塊；將剪切好的小塊用眼科鑷送入培養(yǎng)瓶，用接種針將其均勻擺置，間隔0.5cm；組織塊放好后，輕輕將培養(yǎng)瓶翻轉(zhuǎn)，讓瓶底朝上，蓋好瓶蓋，放置在37℃CO2培養(yǎng)箱內(nèi)；放置3小時(shí)，將培養(yǎng)瓶慢慢翻轉(zhuǎn)平放，向瓶內(nèi)注入10mlRPMI1640培養(yǎng)液，所述培養(yǎng)液含20％血清，靜置培養(yǎng)；原代培養(yǎng)每3天換液一次，去除已漂浮的組織塊和殘留的血細(xì)胞；當(dāng)由組織塊中長出的細(xì)胞能夠長滿培養(yǎng)瓶底部后，進(jìn)行細(xì)胞傳代，具體步驟如下：向瓶中加入1-2ml消化液，室溫3分鐘后，觀察到細(xì)胞質(zhì)回縮、細(xì)胞間隙增大，吸除消化液，加入PBS將培養(yǎng)瓶殘留的消化液洗掉；用吸管吸去瓶內(nèi)培養(yǎng)液，反復(fù)吹打瓶壁細(xì)胞，使之脫離瓶壁形成細(xì)胞懸液，計(jì)數(shù)，分別接種新的培養(yǎng)瓶，當(dāng)細(xì)胞傳代到第三代，將原代培養(yǎng)時(shí)用的20％胎牛血清降為10％；來源于該肺組織的原代培養(yǎng)傳代的細(xì)胞呈現(xiàn)上皮樣，細(xì)胞形態(tài)均一，無接觸抑制，并且生長十分迅速，兩天就能長滿瓶底，需要傳代，該細(xì)胞系進(jìn)行了100代以上的培養(yǎng)，該細(xì)胞系即為LM-MCF-7；4)LM-MCF-7細(xì)胞體內(nèi)成瘤：當(dāng)LM-MCF-7細(xì)胞體外培養(yǎng)20代后，將瘤細(xì)胞再回注到SCID鼠皮下，方法同前；成瘤率達(dá)到100％，并且在SCID鼠的肺臟、腎臟、脾臟、骨髓、淋巴結(jié)和心臟出現(xiàn)廣泛轉(zhuǎn)移。 |
| 摘要 | 本發(fā)明涉及癌細(xì)胞系，特別是一種高轉(zhuǎn)移傾向的人乳腺癌細(xì)胞系及其建立的方法，屬動(dòng)物細(xì)胞系領(lǐng)域。有關(guān)腫瘤的侵襲與移轉(zhuǎn)的機(jī)制目前尚不十分清楚。需要建立腫瘤轉(zhuǎn)移動(dòng)物模型對其進(jìn)行深入的研究。以往在腫瘤轉(zhuǎn)移動(dòng)物模型中應(yīng)用裸鼠，在本發(fā)明中，我們采用SCID小鼠作為實(shí)驗(yàn)對象，取乳腺癌親本MCF-7細(xì)胞懸液(5×107/0.2ml)皮下接種于SCID小鼠肩部，接種MCF-7細(xì)胞68天后，將SCID鼠處死，取出肺臟，進(jìn)行原代培養(yǎng)，當(dāng)由組織塊中長出的細(xì)胞能夠長滿培養(yǎng)瓶底部后，進(jìn)行細(xì)胞傳代，將該細(xì)胞命名為LM-MCF-7。當(dāng)LM-MCF-7細(xì)胞體外培養(yǎng)20代后，將瘤細(xì)胞再回注到SCID鼠皮下，方法同前；成瘤率達(dá)到100％(5/5只)，并且在SCID鼠的肺臟、腎臟、脾臟、骨髓、淋巴結(jié)和心臟等臟器出現(xiàn)廣泛轉(zhuǎn)移。 |
| 國際公布 |
