| 公開(公告)號 | CN1259336C |
| 公開(公告)日 | 2006.06.14 |
| 申請(專利)號 | CN200310121343.5 |
| 申請日期 | 2003.12.12 |
| 專利名稱 | 一種復(fù)合干擾素的純化方法 |
| 主分類號 | C07K14/555(2006.01)I |
| 分類號 | C07K14/555(2006.01)I;C07K1/14(2006.01)I |
| 分案原申請?zhí)? | |
| 優(yōu)先權(quán) | |
| 申請(專利權(quán))人 | 中國科學(xué)院過程工程研究所 |
| 發(fā)明(設(shè)計)人 | 劉永東;李京京;王芳薇;蘇志國 |
| 地址 | 100080北京市海淀區(qū)中關(guān)村北二條1號 |
| 頒證日 | |
| 國際申請 | |
| 進(jìn)入國家日期 | |
| 專利代理機(jī)構(gòu) | 北京泛華偉業(yè)知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 |
| 代理人 | 王鳳華 |
| 國省代碼 | 北京;11 |
| 主權(quán)項 | 一種重組復(fù)合干擾素的純化方法，包括如下步驟：1)將經(jīng)復(fù)合干擾素基因人工構(gòu)建、并由含此DNA序列表達(dá)載體的宿主細(xì)胞發(fā)酵并收集的包涵體變性得到的復(fù)合干擾素，邊攪拌邊加入緩沖液D，所加入的緩沖液D與復(fù)合干擾素的體積比為40～100∶1，然后將混合液靜置過夜；2)將步驟1)經(jīng)靜置的混合液裝入可以透過分子量8000-50000的透析袋中，于緩沖液E中透析12～24小時，進(jìn)行復(fù)合干擾素蛋白質(zhì)的復(fù)性，緩沖液E與混合液的體積比為5～20∶1；3)從步驟2)經(jīng)透析的混合液中分出上清液，得到復(fù)性的復(fù)合干擾素溶液；4)用緩沖液F平衡裝有強(qiáng)陽離子交換介質(zhì)的層析柱，介質(zhì)裝填高度為5～25cm，將步驟3)的已復(fù)性的復(fù)合干擾素溶液調(diào)pH至3.5～6.0后上柱，上樣量為8-15mg/ml，然后用2倍柱體積的緩沖液F淋洗，再用5～10倍柱體積的含緩沖液G和緩沖液F的混合液進(jìn)行梯度洗脫，淋洗時的流速為50～200cm/min，收集第二個蛋白洗脫峰時的洗脫液，最后將此洗脫液濃縮，得到純化的復(fù)合干擾素；所述步驟1)的緩沖液D為100mMTris、0.5M精氨酸和0.2mM乙二胺四乙酸二鈉，用HCl調(diào)pH至8.3；所述步驟2)的緩沖液E為25mMTris-HCl，pH8.3；所述步驟4)的緩沖液F為pH3.5～6.0的5～50mM磷酸氫二鈉—磷酸二氫鈉，檸檬酸—檸檬酸鈉，磷酸氫二鈉—檸檬酸，檸檬酸—氫氧化鈉—鹽酸，乙酸鈉—乙酸或磷酸二氫鉀—氫氧化鈉；所述步驟4)的緩沖液G為1MNaCl溶于所述步驟4)的緩沖液F中；所述步驟4)用于梯度淋洗的混合緩沖液中緩沖液G占混合緩沖液總體積的10～60％。 |
| 摘要 | 本發(fā)明提供一種復(fù)合干擾素的純化方法，包括如下步驟：將經(jīng)常規(guī)方法發(fā)酵并收集的包涵體變性得到的復(fù)合干擾素，邊攪拌邊加入緩沖液D，然后在可以透過分子量50000以下的透析袋中，于緩沖液E中透析，進(jìn)行復(fù)合干擾素蛋白質(zhì)的復(fù)性；分出上清液，在裝有強(qiáng)陽離子交換介質(zhì)的層析柱上用緩沖液F和緩沖液G梯度洗脫，得到純化的復(fù)合干擾素。本方法不僅能完全去除分子量在3～4萬的雜蛋白，而且能將復(fù)性中間體與完全復(fù)性的蛋白基本分開，從而所得復(fù)合干擾素純度高，產(chǎn)品結(jié)構(gòu)也更均一。 |
| 國際公布 |
