| 公開(公告)號 | CN1284797C |
| 公開(公告)日 | 2006.11.15 |
| 申請(專利)號 | CN200510012414.7 |
| 申請日期 | 2005.03.22 |
| 專利名稱 | 人重組組織因子的構(gòu)建表達(dá)、純化方法及其應(yīng)用 |
| 主分類號 | C07K14/435(2006.01)I |
| 分類號 | C07K14/435(2006.01)I;C07K14/475(2006.01)I;C12N15/70(2006.01)I;C12N15/10(2006.01)I;C12N15/12(2006.01)I;C12P21/02(2006.01)I;G01N33/68(2006.01)I;G01N33/53(2006.01)I;C12Q1/56(2006.01)I |
| 分案原申請?zhí)? | |
| 優(yōu)先權(quán) | |
| 申請(專利權(quán))人 | 太原博奧特生物技術(shù)有限公司 |
| 發(fā)明(設(shè)計(jì))人 | 焦進(jìn)安;趙 邑;郝建平;李晉川;謝 紅;趙峰梅 |
| 地址 | 030006山西省太原市師范街110號 |
| 頒證日 | |
| 國際申請 | |
| 進(jìn)入國家日期 | |
| 專利代理機(jī)構(gòu) | 山西五維專利事務(wù)所有限公司 |
| 代理人 | 李 毅 |
| 國省代碼 | 山西;14 |
| 主權(quán)項(xiàng) | 一種人重組組織因子，其核苷酸序列如圖1所示，含有天然人組織因子跨膜部分和膜外部分的243個(gè)氨基酸殘基，為缺失胞內(nèi)區(qū)的截?cái)嘈腿酥亟M組織因子recombinant human tissue factor，簡稱rhTF243，具有天然人組織因子的全部凝血活性。 |
| 摘要 | 本發(fā)明涉及人重組組織因子的構(gòu)建、表達(dá)和純化方法及應(yīng)用。從人胎盤中獲取得到的TF基因片段與phoA質(zhì)粒重組，構(gòu)建質(zhì)粒載體pTF243，轉(zhuǎn)化到大腸桿菌MM294中，篩選得到工程菌株，接入培養(yǎng)基直接發(fā)酵表達(dá)，得到的菌液先使用Q-Sepharose Fast Flow基質(zhì)離子交換層析，再通過TF單抗免疫親和層析柱吸附洗脫，得到rhTF243蛋白。本發(fā)明中TF隨培養(yǎng)基中磷的消耗而直接表達(dá)，不需增加誘導(dǎo)物和對蛋白質(zhì)進(jìn)行變性與復(fù)性，簡化了發(fā)酵工藝，提高了表達(dá)率，采用TF單抗純化rhTF243蛋白，不會受到不可逆損傷，獲得rhTF243純度95％以上，收率大于60％，制備的PT試劑穩(wěn)定性和敏感性均得到了提高。 |
| 國際公布 |
