| 公開(公告)號 | CN1316014C |
| 公開(公告)日 | 2007.05.16 |
| 申請(專利)號 | CN200410017587.3 |
| 申請日期 | 2004.04.09 |
| 專利名稱 | 骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的規(guī)�；苽浞椒� |
| 主分類號 | C12N5/08(2006.01)I |
| 分類號 | C12N5/08(2006.01)I |
| 分案原申請?zhí)? | |
| 優(yōu)先權(quán) | |
| 申請(專利權(quán))人 | 華東理工大學(xué) |
| 發(fā)明(設(shè)計(jì))人 | 周 燕;譚文松;胡靜波;蔣丹丹 |
| 地址 | 200237上海市梅隴路130號 |
| 頒證日 | |
| 國際申請 | |
| 進(jìn)入國家日期 | |
| 專利代理機(jī)構(gòu) | 中原信達(dá)知識產(chǎn)權(quán)代理有限責(zé)任公司 |
| 代理人 | 羅大忱 |
| 國省代碼 | 上海;31 |
| 主權(quán)項(xiàng) | 一種骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的規(guī)模化制備方法，其特征在于，包括如下步驟：(1)MSCs分離培養(yǎng)將從骨髓細(xì)胞懸液中分離的單個(gè)核細(xì)胞，以1～5×105cells/cm2的密度接種接種在添加了10％胎牛血清的α-MEM中進(jìn)行原代培養(yǎng)，24小時(shí)后更換培養(yǎng)液，除去未貼壁細(xì)胞，此后每1～3天換液一次，原代細(xì)胞長至匯合后以0.25％胰酶+0.02％EDTA消化細(xì)胞；(2)MSCs的微載體系統(tǒng)懸浮培養(yǎng)細(xì)胞以0.5～2.5×105cells/ml密度接種于預(yù)先硅化過的攪拌懸浮培養(yǎng)裝置中，與CT-3微載體共同培養(yǎng)，微載體用量為2～10mg/ml，采用10～30rpm轉(zhuǎn)速進(jìn)行接種，24小時(shí)后提高轉(zhuǎn)速至40～60rpm進(jìn)行培養(yǎng)，培養(yǎng)基為添加了10％胎牛血清的α-MEM，每天至每2天，半量換液至全換液，3～4天后每天半量換液至全換液；培養(yǎng)條件為37℃、5％CO2、飽和濕度，生物反應(yīng)器系統(tǒng)設(shè)定操作條件為：pH7.0～7.2，溫度37℃，溶氧為30％～50％空氣飽和度；(3)收獲細(xì)胞細(xì)胞長滿微載體后，以胰酶或膠原酶消化微載體表面包被的膠原，使細(xì)胞從微載體表面脫落下來，通過靜止沉降法分離微載體和細(xì)胞。 |
| 摘要 | 本發(fā)明公開了一種骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的規(guī)�；苽浞椒�。具體包括如下步驟：1.MSCs分離培養(yǎng)，2.MSCs的微載體系統(tǒng)懸浮培養(yǎng)，3.收獲細(xì)胞。采用本發(fā)明的方法，可以消除常規(guī)靜態(tài)培養(yǎng)系統(tǒng)中的面積限制以及營養(yǎng)物、代謝副產(chǎn)物的濃度梯度，避免了頻繁的傳代操作，有利于細(xì)胞生長和保持干細(xì)胞特性，采用生物反應(yīng)器培養(yǎng)，可收獲1×109細(xì)胞，真正實(shí)現(xiàn)規(guī)模化制備骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞，為工程化組織構(gòu)建、細(xì)胞治療、基因治療或其它科學(xué)研究提供大量的種子細(xì)胞。 |
| 國際公布 |
