公開(公告)號(hào)
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CN1319988C
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公開(公告)日
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2007.06.06
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申請(qǐng)(專利)號(hào)
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CN200410067157.2
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申請(qǐng)日期
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2004.10.14
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專利名稱
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一種高親和力免疫球蛋白結(jié)合分子及其制備方法
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主分類號(hào)
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C07K14/00(2006.01)I
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分類號(hào)
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C07K14/00(2006.01)I;C07K14/31(2006.01)I;C07K14/315(2006.01)I;C12N15/62(2006.01)I;G01N33/535(2006.01)I;G01N33/53(2006.01)I
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分案原申請(qǐng)?zhí)? |
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優(yōu)先權(quán)
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申請(qǐng)(專利權(quán))人
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上海潤(rùn)龍生物科技有限公司
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發(fā)明(設(shè)計(jì))人
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潘 衛(wèi);徐 容;王金華;謝天培;李云華;王德貴;沈毅珺;揚(yáng) 華;王錦紅;許浩坤
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地址
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200065上海市普陀區(qū)延長(zhǎng)西路25號(hào)
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頒證日
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國(guó)際申請(qǐng)
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進(jìn)入國(guó)家日期
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專利代理機(jī)構(gòu)
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上海光華專利事務(wù)所
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代理人
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余明偉;沈錫英
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國(guó)省代碼
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上海;31
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主權(quán)項(xiàng)
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一種重組Ig結(jié)合分子文庫,其特征在于:所述文庫是由以不同的Ig結(jié)合分子葡萄球菌A蛋白的A、B、C、D、E結(jié)構(gòu)域,大消化鏈球菌L蛋白的B1、B2、B3、B4、B5結(jié)構(gòu)域,G群或C群鏈球菌G蛋白的G1、G2結(jié)構(gòu)域的單個(gè)抗體結(jié)合結(jié)構(gòu)域?yàn)榻Y(jié)構(gòu)單元,以結(jié)構(gòu)單元隨機(jī)DNA重排形成的Ig結(jié)合分子組成,其中上述結(jié)構(gòu)域的核苷酸序列分別為:SEQ ID NO:1-SEQ ID NO:12,單個(gè)結(jié)構(gòu)域之間以核苷酸GAGCTC連接,結(jié)構(gòu)單元隨機(jī)DNA重排形成的Ig結(jié)合分子通過如下方法獲得:(1)將Ig結(jié)合分子葡萄球菌A蛋白的A、B、C、D、E結(jié)構(gòu)域,大消化鏈球菌L蛋白的B1、B2、B3、B4、B5結(jié)構(gòu)域,G群或C群鏈球菌G蛋白的G1、G2結(jié)構(gòu)域的單個(gè)抗體結(jié)合結(jié)構(gòu)域分別經(jīng)PCR擴(kuò)增引入Sac I酶切位點(diǎn)作為連接點(diǎn);(2)將PCR回收產(chǎn)物分別經(jīng)Sac I酶切消化;(3)將步驟(2)獲得的Sac I酶切消化產(chǎn)物混合,用T4連接酶將各單結(jié)構(gòu)域進(jìn)行隨機(jī)連接重組。
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摘要
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本發(fā)明涉及一種重組免疫球蛋白結(jié)合分子文庫、其制備方法及其應(yīng)用。本發(fā)明是以來自不同種屬免疫球蛋白結(jié)合分子葡萄球菌A蛋白protein A的A、B、C、D、E結(jié)構(gòu)域、大消化鏈球菌proteinL的B1、B2、B3、B4、B5結(jié)構(gòu)域、C和G群鏈球菌蛋白G protein G的G1、G2為結(jié)構(gòu)單元,將上述結(jié)構(gòu)單元隨機(jī)連接,構(gòu)建重組Ig結(jié)合分子文庫,將該文庫展示在噬菌體表面;以免疫球蛋白對(duì)噬菌體展示重組Ig結(jié)合分子文庫進(jìn)行3-4輪親和篩選,獲得系列高親和力免疫球蛋白結(jié)合分子噬菌體文庫。上述文庫可用于篩選高親和力Ig結(jié)合分子。
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國(guó)際公布
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