| 公開(公告)號 | CN1927886A |
| 公開(公告)日 | 2007.03.14 |
| 申請(專利)號 | CN200510098365.3 |
| 申請日期 | 2005.09.09 |
| 專利名稱 | 防治小鵝瘟病的異源抗小鵝瘟蛋黃抗體的制備方法與應(yīng)用 |
| 主分類號 | C07K16/10(2006.01)I |
| 分類號 | C07K16/10(2006.01)I;A61K39/395(2006.01)I;A61P31/12(2006.01)I |
| 分案原申請?zhí)? | |
| 優(yōu)先權(quán) | |
| 申請(專利權(quán))人 | 重慶永健生物技術(shù)有限責(zé)任公司 |
| 發(fā)明(設(shè)計(jì))人 | 何洪章 |
| 地址 | 402460重慶市榮昌縣學(xué)院路158號 |
| 頒證日 | |
| 國際申請 | |
| 進(jìn)入國家日期 | |
| 專利代理機(jī)構(gòu) | 北京集佳知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 |
| 代理人 | 劉繼富;顧晉偉 |
| 國省代碼 | 重慶;85 |
| 主權(quán)項(xiàng) | 一種抗小鵝瘟異源蛋黃抗體制備方法，包括下列步驟： (a)將冷凍保存的患小鵝瘟疾病死亡的小鵝腸道病料按照1∶5加滅菌生理鹽水搗碎，凍融2次后，形成混合組織懸液；將混合組織懸液進(jìn)行4000rpm離心，收集上清液并于56℃處理30分鐘，每毫升加入青霉素和鏈霉素1000單位，4℃處理2小時(shí)；將青、鏈霉素處理后的種毒液用滅菌生理鹽水稀釋100倍，經(jīng)0.22um微孔濾膜過濾除菌，以0.1ml/只的劑量接種13-15日齡非免疫鵝胚尿囊腔，37℃孵育，棄去48小時(shí)內(nèi)的死亡鵝胚，收集48-120小時(shí)內(nèi)死亡的胚；無菌采集尿囊液及羊水； (b)將收獲的尿囊毒液中加入0.1％甲醛溶液，37℃密閉滅活48小時(shí)；滅活完成后，按滅活毒液96份，滅菌吐溫-804份配制，即為制苗用抗原；按油相3份、水相1份的比例取油相、水相攪拌均勻，加入高壓均質(zhì)機(jī)中，調(diào)節(jié)壓力為35mpa，乳化制備成小鵝瘟滅活油乳劑疫苗，并加入1％硫柳汞溶液使之終濃度為萬分之一； (c)以制備的小鵝瘟滅活油乳劑抗原頸部皮下注射0.5ml/只；2周后，以制備的小鵝瘟滅活油乳劑抗原頸部皮下注射1.0ml/只，進(jìn)行強(qiáng)化免疫；間隔2周后用滅活油乳劑抗原再次強(qiáng)化免疫一次，頸部皮下注射2.0ml/只；以后間隔8周進(jìn)行一次強(qiáng)化免疫，每次頸部皮下注射2.0ml/只； (d)從第二次強(qiáng)化免疫后第7天開始，每隔三天抽樣用瓊脂擴(kuò)散方法測定高免蛋黃中抗小鵝瘟特異抗體效價(jià)；蛋黃與生理鹽水按1∶3(V/V)稀釋后，加與蛋黃等體積三氯甲烷進(jìn)行萃提，用瓊擴(kuò)方法檢測萃提上清液中抗小鵝瘟特異抗體效價(jià)，若上清液瓊擴(kuò)抗體效價(jià)達(dá)到1∶64以上即可集蛋，用于制備小鵝瘟蛋黃抗體； (e)將蛋殼消毒，打蛋并充分除去蛋清、胚盤和系帶，收集蛋黃；于蛋黃中加入3倍體積的生理鹽水，充分?jǐn)嚢杈鶆�，然后在蛋黃液中加入與蛋黃等體積的三氯甲烷，充分振蕩混合均勻，室溫作用60分鐘，以3500-4000rpm離心30分鐘，收集上層清液備用； (f)在分離的上清液中加入終濃度為0.05％的甲醛溶液，充分?jǐn)嚢杌靹颍?7℃保溫密封8-12小時(shí)；用0.22μm微孔濾膜過濾除菌，即得瓊擴(kuò)抗體效價(jià)達(dá)到1∶32及以上異源抗小鵝瘟蛋黃抗體。 |
| 摘要 | 本發(fā)明為一種用于雛鵝小鵝瘟疾病的預(yù)防和治療的蛋黃抗體的制備方法。它改變了使用母鵝進(jìn)行高免用于制備抗小鵝瘟蛋黃抗體的先例，而改用鴨和雞用于抗小鵝瘟蛋黃抗體的制備，包括小鵝瘟種毒的制取，高免抗原的制取，蛋黃抗體的制取。經(jīng)臨床試驗(yàn)和使用結(jié)果表明：用本方法制備的異源小鵝瘟蛋黃抗體用于預(yù)防和治療雛鵝小鵝瘟疾病，預(yù)防率和治愈率高、藥效期長，藥物效果顯著，其預(yù)防率為95％以上，早期治愈率達(dá)80％以上。用該方法制成的高免抗體，成本明顯低于同源的鵝蛋黃抗體和其它血清，且可預(yù)防由同源蛋黃抗體所致的垂直傳播疾病的影響。 |
| 國際公布 |
