冬凌草素

    1.抗腫瘤作用
冬凌草素體外對(duì)人體食管鱗癌細(xì)胞 CaEs-17 有明顯的細(xì)胞毒作用,3μg/ml 濃度細(xì)胞生長(zhǎng)抑制率為75%。
冬凌草素對(duì)人胃腺癌Mgc80-3細(xì)胞有殺滅作用。該藥對(duì)指數(shù)生長(zhǎng)期細(xì)胞作用的劑量-存活率曲線屬閾值指數(shù)型。生長(zhǎng)期細(xì)胞對(duì)藥物耐受,在所用劑量范圍內(nèi)未測(cè)及明確的指數(shù)殺滅作用。同步增殖細(xì)胞對(duì)藥物的敏感性缺乏明顯的差異。
對(duì)人體肝癌細(xì)胞株BEL-7401及人體食管癌109細(xì)胞均有較強(qiáng)的殺傷作用,對(duì)BEL-7401細(xì)胞株的50%抑制濃度(IC50)為4mg/ml。冬凌草素不僅可使BEL-7401細(xì)胞生長(zhǎng)密度減低,細(xì)胞出現(xiàn)空泡,細(xì)胞變得細(xì)長(zhǎng),分裂指數(shù)降低,核內(nèi)染色質(zhì)凝成小塊并嵌核固縮或裂解,而且可抑制細(xì)胞的再繁殖能力;低濃度時(shí),冬凌草素對(duì)3H-胸腺嘧啶等(3H-TR)摻入DNA的影響不明顯,高濃度時(shí)(8μg/ml)可明顯抑3H-TdR摻入BEL-7401細(xì)胞的DNA中,說(shuō)明高濃度時(shí),冬凌草素可抑制DNA的合成。
冬凌草素對(duì)部分純化的DNA聚合酶a催化的體外白細(xì)胞素DNA合成有明顯抑制作用。冬凌草素與酶液預(yù)保溫,其抑制作用增強(qiáng),而與DNA或脫氧核苷三磷酸預(yù)保溫,抑制作用未增強(qiáng),揭示冬凌草素可能對(duì)DNA聚合酶a有抑制作用。
觀察冬凌草素對(duì)小鼠腫瘤細(xì)胞核苷酸代謝的影響表明:給藥后胸腺嘧啶核苷滲入腫瘤細(xì)胞的酸不溶部分(DNA)減少。而酸溶部分游離的胸腺嘧啶核苷酸增多,其中以胸腺嘧啶核苷酸增加最明顯。提示冬凌草素可能阻斷了脫氧核苷酸底物聚合形成DNA的過(guò)程,而不影響胸腺嘧啶核苷的磷酸化。
采用標(biāo)記前體物摻入法和放射自顯影術(shù)觀察冬凌草素與博萊霉素A5合用對(duì)小鼠體內(nèi)P388白血病、艾氏腹水癌細(xì)胞大分子合成的影響,發(fā)現(xiàn)兩藥合用明顯抑制DNA合成,不影響RNA和蛋白質(zhì)合成,對(duì)腫瘤DNA合成的抑制作用強(qiáng)于對(duì)骨髓細(xì)胞。
冬凌草素腹腔注射10mg/kg,對(duì)艾氏腹水癌、肝癌及肉瘤S180 腹水型等均有明顯抗腫瘤作用,使動(dòng)物平均存活期100%以上,其中部分動(dòng)物可長(zhǎng)期存活;同劑量的冬凌草素對(duì)艾氏腹水癌、肉瘤、肉瘤S180及網(wǎng)織細(xì)胞肉瘤實(shí)體型亦有明顯抗腫瘤作用,對(duì)上述腫瘤的瘤重抑制率在40%～50%之間(P<0.01),但冬凌草素對(duì)小鼠淋巴肉瘤1號(hào)腹水型(L1)、白血病L615等均無(wú)效。
放射自顯影法研究結(jié)果表明,冬凌草素10mg/kg腹腔注射可明顯抑制3H-胸腺嘧啶核等(3H-TdR)之摻入艾氏腹水癌細(xì)胞的DNA中,使標(biāo)記指數(shù)明顯下降:以3H-TdR進(jìn)行脈沖標(biāo)記后,用秋水仙堿阻斷,再給冬凌草素10mg/kg,觀察標(biāo)記分裂指數(shù)(LMI)的變化發(fā)現(xiàn):冬凌草素可明顯減少標(biāo)記分裂指數(shù),對(duì)分裂指數(shù)則無(wú)明顯影響。以上實(shí)驗(yàn)說(shuō)明,冬凌劃素一方面可抑制腫瘤細(xì)胞的DNA合成,又可抑制S期細(xì)胞進(jìn)入M期,但以M 期細(xì)胞無(wú)明顯影響。
用流式細(xì)胞光度術(shù)(FCM)測(cè)定冬凌草素和博萊霉素A5聯(lián)合應(yīng)用對(duì)艾氏腹水癌細(xì)胞增殖周期的影響發(fā)現(xiàn):冬凌草素可阻滯細(xì)胞M→g或M→g1和g2→M 進(jìn)程,導(dǎo)至g2→M%的增加,博萊霉素A5阻斷g2→M 的進(jìn)行,使g2%增加,合用后g2+M%的構(gòu)成比隨時(shí)間延長(zhǎng)而大于單用組,這些現(xiàn)象有利于博萊霉素A5等對(duì)M、g2敏感時(shí)相的細(xì)胞殺傷。
用拒染法測(cè)定DBA小鼠ip1×106個(gè)L1210 細(xì)胞,0～7d呈指數(shù)生長(zhǎng),后趨于“坪期”。Ip冬凌草素15mg/kg,對(duì)d5和d8瘤細(xì)胞的殺傷率分別為73%和39%。用自體放射造影術(shù)研究d6細(xì)胞周期參數(shù)分別為:Tc=14.6±2.0h,T=9.2±0.8h,Tm=0.40±0.07h,Tg1=3.2±0.5h,Tg2=1.8±0.6h,冬凌草素對(duì)Tg2、TM、Ts及Tc均有不同程度的延緩。      采用艾氏腹水癌(ECA)、肉瘤180(S180)及白血病L1210三種瘤株研究冬凌草素對(duì)M 期細(xì)胞的影響及其作用機(jī)制。結(jié)果發(fā)現(xiàn),在三種瘤株中,冬凌草素均有使有絲分裂指數(shù)(MI)先降低后升高的作用。在S180中,先用秋水仙堿6h,再給冬凌草素,證明該藥對(duì)M期細(xì)胞呈現(xiàn)曲型的“秋水仙堿樣改變”。實(shí)驗(yàn)結(jié)果還表明。在冬凌草素作用下,細(xì)胞g2期時(shí)間被延長(zhǎng),g2期細(xì)胞進(jìn)入M期受阻、因此,選用對(duì)g2、M期細(xì)胞敏感的藥物與冬凌草素合用,有可能引起增效作用。
冬凌草素和順氯氨鉑合用對(duì)S180、ECA和P388小鼠淋巴細(xì)胞白血病有協(xié)同作用。
用冬凌草素、博萊霉素A5和消瘤芥不同組合對(duì)移植瘤小鼠的生命延長(zhǎng)率體內(nèi)肉瘤180細(xì)胞增殖抑制作用和體外艾氏腹水癌細(xì)胞的殺傷作用,證明以三藥組合及前兩藥組合方案的抗腫瘤作用最佳。
采用體外集落培養(yǎng)技術(shù)測(cè)定劑量一存活率曲線,比較七種常見(jiàn)腫瘤的人癌細(xì)胞系對(duì)冬凌草素的敏感性,結(jié)果表明:不同細(xì)胞系對(duì)冬凌草素的敏感性差別較大。從存活曲線看,除肺鱗癌LTEP-78有所用劑量范圍內(nèi)僅顯示寬大的戶段外,其它細(xì)胞的存活曲線均為閾值指數(shù)型。對(duì)曲線參數(shù)的分析表明,食管癌CaEs-17和胃腺癌MgC-30-3對(duì)冬凌草素最敏感。肺腺癌SPC-A-1和肺鱗癌LTEP-78最耐受。并證明敏感性大小順序與其起源的腫瘤病理類(lèi)型無(wú)關(guān)。
2.對(duì)免疫功能的影響
以小鼠溶血素測(cè)定法檢查小鼠的體液免疫功能,冬凌草素于抗腫瘤有效劑量時(shí)(10mg/kg)腹腔注射,可輕度抑制雄性小鼠的溶血素形成(最大溶血稀釋度由對(duì)照組的1:256下降到1:64～1:128),對(duì)雌性小鼠的溶血素形成無(wú)影響。
3.抗菌作用
冬凌草素對(duì)19種細(xì)菌有中等程度的抑制作用。對(duì)革蘭氏陽(yáng)性菌效果較好。對(duì)金黃色葡萄球菌的最低抑制濃度為31μg/ml,對(duì)9種革蘭氏陰性菌的最低抑菌濃度為62.5～500μg/ml。
4.對(duì)循環(huán)系統(tǒng)的影響
冬凌草素 3.0mg/kg、10.0mg/kg  iv 能使麻醉家兔心臟的左心室收縮壓(LVSP)、左心室內(nèi)壓開(kāi)始上升至上升速率峰值(±dp/dtmax),心肌收縮成分縮短速率峰值(VPm)、壓力變化速率環(huán)(p-dp/dt)、環(huán)體面積等均縮小,左心室內(nèi)壓開(kāi)始上升至上升速率峰值的時(shí)間(t-dp/dtmax 延長(zhǎng),HR減慢,即負(fù)性肌力、負(fù)性頻率作用。此外冬凌草素還具有明顯的降壓作用,其特點(diǎn)上主動(dòng)脈舒張壓(DBP)下降幅度大于主動(dòng)脈收縮壓(SBP),故冬凌草素可能具有抗擴(kuò)張血管作用。
5.殺蟲(chóng)作用
本品對(duì)鱗翅目幼蟲(chóng)有抑制其生長(zhǎng)的作用。
6.體內(nèi)過(guò)程
3H-冬凌草素給小鼠灌服后可自胃腸道吸收,5min后即可在血中測(cè)出放射性,灌服后半小時(shí)血中放射性右達(dá)高峰,1h后下降,2h后又略回升,此后放射性強(qiáng)度緩慢下降,8h后持續(xù)在低水平。給荷瘤小鼠腹腔注射3H-冬凌草素后1、4及24h用液體閃爍計(jì)分別測(cè)定各組織放射性分別發(fā)現(xiàn),用藥后1h,放射性強(qiáng)度以膽囊、腸、肝、腎組織中最高;胰、胃、脾、肺、胸腺及食道組織中次之肌肉、骨、腫瘤、心及腦組織中放射性分布最小;用藥后4h,肺及食道中放射性略有上升;胰腺及腫瘤組織中放射性下降緩慢,其它諸組織中放射性強(qiáng)度則下降幅度較大;24h后,肝、胰、胃及食道中仍有較高的放射性,其它組織中則很低。腹腔注射3H-冬凌草素,主要由尿及大便中排泄,24h內(nèi)由尿及糞便分別排出總放射量的28.2%及25.1%,其中大部分于給藥后8小時(shí)內(nèi)排出。灌服3H-冬凌草素后,主要由糞便排出,24h內(nèi)排出16.5%,自尿外排僅4.6%。
以不標(biāo)記的冬凌草素給小鼠靜注,紫外分光光度計(jì)測(cè)定血中冬凌草素的含量。靜注冬凌草素15mg/kg 后1min,血中濃度可達(dá)75mg/ml,此后血中濃度下降,呈雙相性。其分布半衰期(t1/2 a)為172min,消除半衰期(t1/2/B)為14.9h。藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù):α=0.04032/min,β=0.000775/min;K12=0.0139/min,K21=0.026/min,總分布積(Vd)=291.3ml/kg。由此可見(jiàn),冬凌草素靜注后很快分布到各組織中,自組織中消除較慢。