益元散—甘草酸的測定—高效液相色譜法

本方法采用高效液相色譜法測定益元散中甘草酸的含量。

本方法適用于中藥制劑益元散。

供試品用57%甲醇冷浸法提取益元散中的甘草酸，進入高效液相色譜儀進行色譜分離，用紫外檢測器檢測甘草酸的吸收值，計算出其含量。

1.無水甲醇

2.冰醋酸

3.甘草酸銨鹽對照品

1 儀器

1.1 高效液相色譜儀

1.2 色譜柱

島津PC8 柱( 4 mm ×250 mm ):

1.3 紫外檢測器

2 色譜條件

2.1 流動相：甲醇 水 醋酸 = 57.0 42.6 0.4

2.3柱溫：40 ℃

2.4紫外檢測波長254 nm

2.5 流速：2.0mL/min

1. 稱取供試品

精密稱取本品適量，（相當(dāng)于甘草藥材)0.3g。

2. 對照品溶液的制備

精密稱取甘草酸銨鹽對照品0. 2000 g, 以甲醇熱溶, 置100 m l 容量瓶定容至刻度。

3. 標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備

精確吸取甘草酸銨鹽對照液0. 5m l、1m l、2m l、3m l、4m l、5m l 分別置于5m l 容量瓶中, 用流動相定容搖勻，作為繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線的系列濃度標(biāo)準(zhǔn)溶液。

4.供試品溶液的制備

將供試品置具塞錐形瓶中，以60 m L 57 % 甲醇溶液冷浸提取8 h, 離心分離10 min (3000 rpm ) , 吸取上清液經(jīng)G4 砂芯漏斗抽濾, 濾液置100 m l 容量瓶中, 加57 % 甲醇溶液稀釋至刻度備用，搖勻，作為供試品溶液。

注：“精密稱取”系指稱取重量應(yīng)準(zhǔn)確至所取重量的千分之一�！熬�密量取”系指量取體積的準(zhǔn)確度應(yīng)符合國家標(biāo)準(zhǔn)中對該體積移液管的精度要求。

1. 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

精密吸取上述標(biāo)準(zhǔn)溶液5μL注入高效液相色譜儀，用紫外檢測器測定甘草酸的吸收度，以標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度對峰面積繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，進行線性回歸，得到回歸方程。

2. 供試品的測定

精密吸取上述供試品溶液5μL注入高效液相色譜儀，用紫外檢測器測定甘草酸的吸收度，計算出其含量。

杜學(xué)勤，劉煥蓉，鄧并，HPLC測定冷浸法提取中成藥中的甘草酸含量，山西大學(xué)學(xué)報(自然科學(xué)版)，2002，25 (1)：48-51。