黃連上清丸－小檗堿的測(cè)定－薄層掃描法

本方法采用薄層掃描法測(cè)定黃連上清丸中小檗堿的含量。

本方法適用于中成藥黃連上清丸。

將供試品加鹽酸-甲醇水浴加熱，超聲提取，離心，上清液制成供試液。點(diǎn)樣、展開(kāi)，薄層掃描儀用熒光掃描法進(jìn)行掃描，于波長(zhǎng)λ=366nm測(cè)量小檗堿的吸收度積分值，計(jì)算其含量。

1. 苯

2.甲醇

3.醋酸乙酯

4.鹽酸

5.異丙醇

1 儀器

1.1 超聲清洗器

1.2 薄層掃描儀

1.3涂布器

應(yīng)能使吸附劑在玻璃板上手工或自動(dòng)涂成一層符合厚度要求的均勻薄層。

1.4點(diǎn)樣器

一般采用微升毛細(xì)管或與之相應(yīng)的點(diǎn)樣器材。

1.5展開(kāi)室

可用適合薄層板大小的專(zhuān)用玻璃缸，底部雙槽，蓋子須密閉。

2材料

2.1玻板

用10cm×10cm、10cm×15cm、20cm×10cm或20cm×20cm的規(guī)格，要求光滑、平整，洗凈后不附水珠，晾干。

2.2吸附劑

硅膠G，其顆粒大小一般要求直徑為10～40µm。

1. 對(duì)照品溶液的制備

精密稱(chēng)取干燥至恒重的鹽酸小檗堿對(duì)照品，加甲醇制成每1mL含0.5mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。

2. 供試品溶液的制備

取本品1丸，切碎，精密稱(chēng)取1g，置具塞錐形瓶中，精密加入鹽酸-甲醇(1:10)10mL，稱(chēng)定重量，置50℃熱水浴中加熱15分鐘，放冷，超聲提取30分鐘，放冷，稱(chēng)重，補(bǔ)足減失重量，離心，取上清液作為供試品溶液。

注：“精密稱(chēng)取”系指稱(chēng)取重量應(yīng)準(zhǔn)確至所稱(chēng)取重量的千分之一�！熬�密量取”系指量取體積的準(zhǔn)確度應(yīng)符合國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)中對(duì)該體積移液管的精度要求。

1.薄層板制備

將吸附劑1份和水3份在研缽中向一方向研磨混合，去除表面的氣泡后，倒入涂布器中，在玻板上平穩(wěn)地移動(dòng)涂布器進(jìn)行涂布（厚度為0.25～0.5mm)取下涂好薄層的玻板，于室溫下，置水平臺(tái)上晾干，在反射光及透射光下檢視，表面應(yīng)均勻，平整，無(wú)麻點(diǎn)、無(wú)氣泡、無(wú)破損及污染，于110℃烘30分鐘，冷卻后立即使用或置干燥箱中備用，或用商品預(yù)制板。

2.點(diǎn)樣

精密吸取供試品溶液1µL、對(duì)照品溶液1µL，分別交叉點(diǎn)于硅膠G薄層板上，如用點(diǎn)樣器點(diǎn)樣到薄層板上，一般為圓點(diǎn)，點(diǎn)樣基線(xiàn)距底邊1.0～1.5cm，樣點(diǎn)直徑一般不大于2mm，點(diǎn)間距離可視斑點(diǎn)擴(kuò)散情況，以不影響檢出為宜。點(diǎn)樣時(shí)必須注意勿損傷薄層表面。

3.展開(kāi)

將點(diǎn)好樣品的薄層板放入展開(kāi)缸的展開(kāi)劑中，以苯-醋酸乙酯-甲醇-異丙醇-水（6:3:1.5:1.5:0.3)10℃以下放置12小時(shí)的下層溶液為展開(kāi)劑，雙槽展開(kāi),氨蒸氣飽和15分鐘，展開(kāi)至8～15cm時(shí)，取出薄層板，晾干。

4.標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的制備

精密吸取對(duì)照品溶液1、2、3、4、5µL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，依法展開(kāi)、掃描，測(cè)定斑點(diǎn)熒光強(qiáng)度積分值，以對(duì)照品溶液進(jìn)樣量對(duì)斑點(diǎn)面積積分值繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)，進(jìn)行線(xiàn)性回歸，獲得回歸方程。

5.含量測(cè)定

在薄層板上覆蓋同樣大小的玻璃板，周?chē)�用膠布固定，選擇反射方式，采用熒光掃描法，波長(zhǎng)：λ=366nm，測(cè)量供試品吸收度積分值與對(duì)照品吸收度積分值，計(jì)算。

用外標(biāo)法測(cè)定時(shí)，若對(duì)照品各數(shù)據(jù)點(diǎn)在校正曲線(xiàn)上呈一通過(guò)原點(diǎn)的直線(xiàn)時(shí)，可用一點(diǎn)法校正，如不通過(guò)原點(diǎn)通常宜采用二點(diǎn)法校正，必要時(shí)用多點(diǎn)法校正。

楊霞,李振國(guó),張同領(lǐng).黃連上清丸中小檗堿的含量測(cè)定.中國(guó)藥事,2000，14(1):38-42.