1.4 實驗方法
1.4.1 動物建模 40只大鼠預養(yǎng)一周后,隨機選取一組10只為正常對照組,剩余30只空腹12 h,腹腔注射1% STZ-檸檬酸鈉緩沖液35 mg/kg體質量。對照組注射等量檸檬酸鈉緩沖液,依據72 h后尿糖+++~++++,尾靜脈采血測血糖,血糖≥16. 7 mmol/L者,確定模型建立。除去造模失敗及實驗過程中死亡大鼠,將糖尿病鼠22只納入本實驗。
1.4.2 分組 (1)正常對照組(CN組10只):糖尿病鼠隨機分為;(2)糖尿病組(D組11只):(3)葛根素治療組(S組11只),S組每只給予160 mg/kg/d葛根素注射液進行腹腔注射,CN組腹腔注射等容量0.9%氯化鈉溶液,均連續(xù)干預14周。
1.4.3 標本采集 第14周實驗終止時,各組大鼠在禁食的基礎上,用代謝籠收集24 h尿液,測定尿白蛋白含量,動物經乙醚麻醉后心臟取血。測試生化指標:(1)空腹血糖(fasting blood glucose,F(xiàn)BG)采用便攜式血糖儀測定;(2)尿微量白蛋白(urinary microalbumin,U-mAIb)采用ELISA法測定;(3)內皮素(endothelin,ET)采用放免法測定;(4)降鈣素基因相關肽 (CGRP)用放免法測定。
1.5 統(tǒng)計學方法
所有數(shù)據用SPSS 12.0軟件進行統(tǒng)計分析,實驗所得數(shù)據均以均數(shù)±標準差(x±s)表示,各組均數(shù)之間均用單因素方差檢驗(one-way ANOVA)進行差異性比較,其中P < 0.05為差異有統(tǒng)計學意義,P < 0.01為差異有高度統(tǒng)計學意義。
2 結果
2.1糖尿病大鼠模型的建立
注射STZ后72 h,糖尿病組空腹血糖明顯升高(P < 0.01),空腹血糖均值達到19.51 mmol/L;葡萄糖耐量試驗:兩組大鼠禁食12 h后,按2 g/kg·BW葡萄糖進行灌胃,尾部微量取血,分別測0.5、1.0、2.0 h血糖。實驗組大鼠1 h血糖值達到高峰,2 h仍高;對照組0.5 h達到高峰,2 h恢復空腹水平,提示實驗組出現(xiàn)糖耐量異常,且實驗組大鼠空腹血糖≥16. 7mmol,表明糖尿病大鼠造模成功。見表1。
2.2 葛根素干預對DN大鼠相關生化指標的影響
各組測得FBG、U-mAIb和ET值,D組和S組都較CN組顯著升高(P < 0.05),經過14周葛根素干預后,S組較D組顯著下降(P < 0.05);而血漿CGRP值,D組和S組較CN組顯著下降(P < 0.05),且S組較D組明顯升高(P < 0.05)。見表2。