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本實驗結(jié)果顯示，凍融新生小鼠卵巢異體移植能存活，且原始卵泡能生長發(fā)育至各級卵泡。 PCNA 又稱周期素，與細(xì)胞增殖和DNA合成有關(guān)。本實驗PCNA陽性表達(dá)與Oktay等[4]研究結(jié)果相一致，見于初級卵泡、次級卵泡及竇卵泡的顆粒細(xì)胞及初級卵泡的卵母細(xì)胞，原始卵泡未見PCNA的表達(dá)。兩組移植后14 d的卵巢組織PCNA的陽性表達(dá)均較高，說明移植的卵巢組織均處于良好的生長發(fā)育狀態(tài)，但移植后14 d回收的兩組移植卵巢總卵泡數(shù)明顯少于移植后14 d新鮮小鼠卵巢的總卵泡數(shù)，進一步證實了卵巢組織移植過程中由于無直接血管吻合導(dǎo)致的缺血低氧會損失很大一部分的卵泡[4-5]。本實驗中我們把凍融小鼠卵巢移植至受體小鼠具有豐富血管的腎被膜下，但移植卵巢需要在其周圍重新形成血管網(wǎng)才能恢復(fù)血供，在移植后至血管形成期間卵巢組織由于缺血低氧將導(dǎo)致卵泡的大量丟失，其機制可能與活性氧ROS的釋放有關(guān)[3]。許多領(lǐng)域的研究已經(jīng)證實ROS清除劑（如SOD、抗氧化劑維生素C、維生素E等)可以抑制ROS介導(dǎo)的細(xì)胞凋亡。丹參中所含主要活性成分丹參酚等酚類，具有很強的抗氧化活性，可作為天然的抗氧化劑，因此我們將其應(yīng)用于實驗中。本實驗的結(jié)果顯示丹參組移植后14 d回收卵巢總卵泡數(shù)多于對照組，各級卵泡數(shù)也存在明顯差異，且丹參組的卵泡存活率達(dá)64.1%，顯著高于對照組的卵泡存活率的44.7%，說明丹參能減輕凍融卵巢移植后的缺血低氧損傷，提高卵泡存活率。
SOD是一類金屬酶，廣泛存在于不需氧的生物組織中， 它能催化超氧自由基發(fā)生歧化反應(yīng)，生成過氧化氫和氧，保護細(xì)胞免受損傷。SOD活力的高低間接反映了機體消除氧自由基的能力。丹參是一種強抗氧化劑，它的保護作用可能是抑制自由基介導(dǎo)的細(xì)胞損害作用，保護細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)和功能的完整性。王宇等[6]在大鼠肝的冷凍灌注保存液中加入丹參注射液，然后進行大鼠原位肝移植，發(fā)現(xiàn)丹參組肝組織中的SOD活性明顯升高，肝組織缺血再灌注程度減輕。本實驗結(jié)果亦顯示丹參組各時間段移植卵巢組織中的SOD mRNA的表達(dá)均顯著高于對照組，說明了丹參注射液可能通過增高移植卵巢組織中SOD活性，清除氧自由基，對防治凍融卵巢移植后的缺血低氧損傷起到積極的作用。
NO和NOS與缺血再灌注損傷的關(guān)系密切。NO是一種半衰期很短的自由基氣體，低濃度的NO對組織具有保護作用，而高濃度狀態(tài)下對組織有損害作用。NO是由NOS催化生成的，NOS分為三型：nNOS（神經(jīng)型)、eNOS（內(nèi)皮型)和iNOS（誘導(dǎo)型)，前兩者的激活均依賴于鈣離子和鈣調(diào)蛋白的作用；iNOS在基態(tài)下不表達(dá)，可由炎癥因子、內(nèi)毒素等誘導(dǎo)激活，作用時間長，可催化生成大量NO[7]。Matsumi等發(fā)現(xiàn)，大多數(shù)不成熟的大鼠卵泡顆粒細(xì)胞中存在iNOS。聶瑩雪等[8]實驗結(jié)果顯示，iNOS在缺血l2 h時開始增加， 隨著缺血時間的延長其表達(dá)也逐漸增加。張瑩等[9]將丹參注射液注射至重癥胰腺炎大鼠模型體內(nèi)來觀察iNOS基因的表達(dá)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)丹參早期治療能抑制iNOS表達(dá)從而起到保護胰腺的作用。本實驗中也發(fā)現(xiàn)在卵巢移植后的各時間段均有iNOS mRNA的表達(dá)，在對照組中，第1天 iNOS開始升高，第2天達(dá)到最高值，第14天有所下降，說明iNOS參與了卵巢移植后缺血損傷的過程。與對照組相比，丹參組的iNOS表達(dá)降低，兩組差異存在顯著性，提示丹參注射液可能通過下調(diào)iNOS mRNA的表達(dá)從而抑制NO的過度產(chǎn)生，對卵巢移植后的缺血-再灌注損傷起保護作用。
綜上所述，凍融新生小鼠卵巢同種異體移植原始卵泡能存活并生長發(fā)育至各級卵泡，但移植早期的缺血低氧造成大量卵泡的丟失。丹參可能通過上調(diào)SOD mRNA的表達(dá)，清除氧自由基，下調(diào)iNOS mRNA的表達(dá)，抑制NO過度產(chǎn)生而對卵巢移植后的缺血低氧損傷起保護作用，從而提高卵巢移植后的卵泡存活率。
【參考文獻】
[1] Byrne J, Fears TR, Gail MH, et al. Early menopause in long- term survivors of cancer during adolescence[J]. Am J ObstetGynecol,1992,166(3):788-793.
